德国Lavision Biotec---双光子荧光显微镜TriM Scope

双光子吸收/激发技术的原理：

在强光激发下，分子同时吸收两个光子，从基态跃迁到两倍光子能量的激发态的过程。两个光子可以是相同波长的，也可以是不同波长的，但必须是同时吸收（两个光子到达被激发分子的时间间隔小于1飞秒）。可以这样理解，先吸收一个光子的能量跃迁到一个虚拟的中间态，然后再吸收一个光子的能量跃迁到激发态。

双光子显微镜相对于共聚焦等其他显微镜的优点：

☆ 光损伤小：由于双光子显微镜使用的是可见光或近红外光作为激发光源，这一波段的光对活体细胞和组织的光损伤小，适用于长时间的研究；

☆ 穿透能力强：相对于紫外光，可见光和近红外光都具有更强的穿透能力，因而受生物组织散射的影响更小，解决对生物组织中深层物质的层析成像研究问题；研究表明，共聚焦荧光成像的成像深度一般在50微米左右，而双光子显微镜的成像深度可达1000微米；

☆ 高分辨率：由于双光子吸收截面很小，只有在焦平面很小的区域内可以激发出荧光，双光子吸收仅局限于焦点处的体积约为波长3次方的范围内；

LaVision BioTec的双光子显微镜TriM Scope的优势（同类产品中的优点）:

☆ 的多光束快速扫描模式：用户可根据需要调节光束模式从传统的单光束扫描模式到La Vision BioTec的多光束快速扫描模式，即1、2、4、8、16、32、64束光的不同模式选择。多光束平行扫描技术是指入射光经过分光器，分解为64束光，同时进入显微镜，通过物镜聚焦在样品上，通过XY扫描器利用这64束光同时进行扫描，并调整Z轴进行三维成像，保证的样品损伤的同时极大地提高了扫描速度。

☆ 一个可用软件调节的双光子显微镜：ImSpector Pro软件支持了*的扫描模式，并且支持用户在ms毫秒之内切换扫描区域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光释放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想工具。

☆ 同类产品中具有的检测效率：TriM Scop可以支持最多达8个 non-descanned PMT, NDD可以是cooled generation III GaAsP PMT或者APD detector可以多传输40%效率的量子，比同类产品具备更佳的检测效率。

☆ 世界上能够支持OPO技术的显微镜：OPO技术– 红光和蛋白的激发：经典的Ti:Sa激光器成像红光的能力是非常有限的，因为经典的激发波长是1125到1250 nm, 并不在Ti:Sa激光器的转换范围之类。OPO技术解决了这个问题，因为它能传输可调的fs激光脉冲到>1100 nm的范围。

代双光子显微镜：LaVision BioTec革新的技术提供了的双光子显微镜-TriM Scope I：

☆ 用户可根据需要调节光束模式：从传统的单光束扫描模式到La Vision BioTec的多光束快速扫描模式，即1、2、4、8、16、32、64束光的不同模式选择。快速扫描模式即可保证可允许64束光同时扫描，并且保证的样品损伤，主要有下面三个原因:

Ø 64束光能够提供单光束的64倍荧光强度并且保证低损伤高荧光强度

Ø 保证了高的帧速率

Ø CCD摄像头比PMTs更高灵敏度

☆ TriM Scope 可以提供最多达8个NDD摄像头给经典的单光束扫描显微镜，2个CCD摄像头，1个TCSPC 探测器为FILM（Fluorescence Lifetime Imaging Microscope ）测量。3 个NDD可以安装到靠近物镜的位置，2个 NDD可以插入到传送器。

☆ LaVision BioTec的ImSpector Pro软件支持了*的扫描模式，并且支持用户在ms毫秒之内切换扫描区域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光释放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想工具。

☆ TriM Scope 还可以结合1个OPO使用，OPO可以转换Ti:Sa激光器的波长从800-880 nm转变到1100-1300 nm。因此红光染料或者蛋白质可以被有效地激发出双光子，保证了很低的漂白率和最深的穿透深度。LaVision BioTec可以同时使用Ti:Sa激光和OPO来扫描，就能同时激发出绿/黄和红光。

第二代双光子显微镜 : LaVision BioTec的双光子显微镜-第二代双光子显微镜TriM Scope II具有新的特点：

☆ 自动校准的双光子显微镜

☆ 穿透最深的样品深度，并能应用OPO技术

☆ 可升级到LaVision BioTec的64束光分光技术

☆ 多用户使用环境中的双光子显微镜

TriM Scope II 双光子显微镜提供了第二代的双光子显微镜，并且在各种使用环境下能够完成快速、深度成像。基本配置是单光束扫描元件，包括正置机身和2个靠近物镜的NDD检测器。作为选件，该显微镜可以配置:

☆ LaVision BioTec的光学分光器，用于64路光束的平行扫描

☆ 最多可达到8个NDD检测器

☆ 各种不同的CCD摄像头

☆ LaVision BioTec的快速TCSPS检测器

☆ 用于共聚焦检测的descanned检测器

☆ 预啁啾补偿器

☆ OPO