Thermo Scientific LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒为利用电泳迁移率变动实验 (EMSA) 研究 RNA 蛋白相互作用提供了一种无放射性解决方案。

LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒的特点：

•灵敏 — 化学发光检测与放射性检测相当
•节省时间 — 与放射性系统所需的 16 小时曝光相比，X 射线胶片在曝光 1 至 5 分钟后即可显影
•灵活 — 兼容通过不同方法化的 RNA 探针
•易于使用 — 全套试剂盒包括用于结合反应和 RNA 探针检测的优化试剂
•无放射性 — 不存在放射性 RNA 探针所具有的废弃物问题

RNA EMSA 试剂盒使用化 RNA 探针和化学发光底物系统，可快速且安全地检测 RNA-蛋白复合物，灵敏度与传统 ³²P-同位素方法相当。全套试剂盒包含构建和优化蛋白-RNA 结合条件所需的全部试剂、用于蛋白-RNA 相互作用的阳性对照及核酸相互作用化学发光检测的全部试剂。

关于 LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒
LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒是通过与常用 DNA 凝胶迁移实验相似的凝胶电泳迁移模式的变化检测蛋白-RNA 相互作用的体外技术。在 RNA EMSA 中，将标记的 RNA 探针与蛋白样品一起孵育，以开始结合。形成复合物后，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品。因为 RNA-蛋白复合物的迁移速度比游离 RNA 探针慢，所以使用 RNA 凝胶迁移实验可以观察到迁移距离。通过与过量未标记 RNA 结合竞争以减少特异性相互作用信号，验证了 RNA-蛋白相互作用的特异性。一般来说，突变或不相关 RNA 探针预计不会因特异性相互作用而竞争，在 EMSA 中检测时特定条带迁移的强度不应降低。完整的 LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒包含设置和优化 RNA 凝胶迁移分析所需的所有试剂，包括 RNA-蛋白质复合物形成的阳性对照。

LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒使用化 RNA 探针、辣根过氧化物酶标记的亲和素和化学发光检测，以提供与使用放射性 RNA 探针时相似的灵敏度，但检测速度更快。标记的 RNA 探针可以在市场上购买或通过使用化核苷酸进行失控体外转录反应生成或通过使用 Thermo Scientific Pierce RNA 3' 末端化试剂盒将标记酶促连接至 RNA 链的 3' 末端生成。LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒对于通过这三种方法中的任何一种进行化的 RNA 探针都有效；然而，在失控体外转录 RNA 探针合成期间，RNA 二级结构可能会受到化核苷酸的内部掺入的影响。因此，对于某些相互作用，可能需要定制的合成 RNA 探针或 3' 末端化探针才能实现适当的蛋白-RNA 相互作用。

关于 LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒的阳性对照品
LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒中包括的阳性对照品是铁反应元件 (IRE) RNA 探针。IRE 结合反应与其他实验样品同时进行设置和检测。在缺铁条件下，铁反应蛋白 (IRP) 仍与细胞中存在的 IRE RNA 结合，有效抑制铁蛋白（铁存储蛋白）的翻译，然后抑制转铁蛋白受体。在富铁条件下，IRE 结合活性丧失，进行铁蛋白和转铁蛋白翻译。该系统普遍存在，并可产生稳健的条带迁移。用 200 倍摩尔过量未标记 IRE RNA 孵育阳性对照反应将使特异性 IRE 条带迁移信号减少约 70%，而相似倍数过量的无关 RNA 探针将不会使 IRE 条带迁移显著减少。这些对照品可用于各 RNA 凝胶迁移实验，以验证蛋白-RNA 复合物形成的正确设置、电泳、转移和检测。

相关产品
用于 LightShift™ 化学发光 RNA EMSA 试剂盒的 tRNA