InvitrogenDynabeads™ mRNA DIRECT™ 纯化试剂盒
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Dynabeads® mRNA DIRECT™ 试剂盒,设计用于直接从动物和植物细胞和组织的粗裂解液中简单、快速地分离纯净、完整的聚腺苷酸化 (polyA) mRNA。分离出的 mRNA 适用于所有下游应用。
Dynabeads® mRNA DIRECT™ 试剂盒的优势:
•快速 — 15分钟的程序即可获得纯净、完整的 mRNA
• 高纯 mRNA 分离 — cDNA 合成上游的理想选择
• 灵敏的 mRNA 分离 — 可实现来自超小起始样品的 cDNA 合成和 cDNA 文库构建(支持从单个细胞构建 cDNA 文库)
系统概述
分离方案依赖于在大多数 mRNA 3' 端 polyA 残基与共价偶联到 Dynabeads® 表面的寡核苷酸 (dT)25 之间的碱基配对。其他缺乏 polyA 尾的 RNA 种类不会与微珠杂交,并且易于洗涤。核糖体 RNA、DNA、蛋白和小 RNA 分子(如转运 RNA、微小 RNA 和小核仁 RNA)不会与珠结合且会被丢弃。裂解/结合缓冲液中的 RNase 抑制剂以及严格的杂交和洗涤条件,可确保从富含 RNase 的粗制样品中分离出纯净、完整的 mRNA,而无需使用强离液剂。mRNA 纯化微珠,可以从极广泛的粗制起始样品中,特异性靶向捕获 mRNA 转录组(参见方案)。1 mg Dynabeads® 寡核苷酸 (dT)25 微珠 (200µL) 能够结合高达 2 µg mRNA。典型的哺乳动物细胞含有约 10–30 pg 的总 RNA,其中 1–5% 是 mRNA。