一、技术路线：

（一）A、腺病毒载体构建：

本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架，在克隆、包装、扩增等各部条件做了改进和优化，达到了克隆阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基础上，还拓展了更广泛的应用，可以提供各种带报告基因的，带不同标签的腺病毒构建和包装服务。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导，基因转位，Co-IP，动物实验，干细胞研究等科研实验。并且可以完成较高难度的克隆构建，包括具有细胞毒性作用基因的腺病毒构建，在短时间内完成从原始质粒到病毒DNA的构建工作。 

• 克隆目的基因到穿梭载体（中介载体）及鉴定

根据客户提供的原始质粒信息确定克隆方案：

• 如果原始质粒与本系统所用穿梭载体有匹配酶切位点，采用相应的内切酶切下相应片断，回收并连接到穿梭载体。酶切，测序鉴定；

• 如果原始质粒与本系统所用穿梭载体没有匹配酶切位点，设计带有特殊接头的引物进行PCR扩增，得到目的片断，采用相应的内切酶切下相应片断，回收并连接到穿梭载体。酶切，测序鉴定；

• 对于不适用于以上方案或者有特定要求的样品，与客户协商定制具体实施方案

2）克隆目的基因到腺病毒载体pAdPL及鉴定

利用重组技术将目的片段的表达框从穿梭载体转移到腺病毒载体。

酶切鉴定阳性克隆，将阳性克隆测序二次鉴定。

B、慢病毒载体构建

慢病毒（Lent virus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体，该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，达到持久性表达的效果。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

（二）病毒包装、扩增：

• 将鉴定正确的基因克隆到慢病毒载体，与辅助载体一起转染293T细胞进行包装；

• 将包装好的病毒超速离心收集；

• 将浓缩病毒进行滴定，滴定结果单位为PFU/ml（一般为5×108 PFU/ml以上，体积为500μl以上，根据客户需要，不同量有价格差异），慢病毒包装4500.00/ml过表达，2500.00/ml干扰

二、质量控制与鉴定：

• 测序鉴定

• 根据特定引物作RT-PCR鉴定

• 蛋白表达鉴定（根据客户要求并由客户提供高特异性抗体）