制备DNA测序模板实验
时间:2016-03-22 阅读:152
制备DNA测序模板实验
标签: DNA 测序 模板
本实验包含了用于制备适用于双脱氧测序的模板及适用于末端标记和化学测序的DNA的实验方案。所有用于双脱氧测序的双链模板在与引物退火前必须变性,在一般应用上,碱变性在测序中的效果比热变性好。
- 制备单链M13噬菌体DNA
- 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
- 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性
实验材料 | 大肠杆菌 |
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试剂、试剂盒 | LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇 |
仪器、耗材 | 巴斯德吸管试管离心机 |
实验步骤 | 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA,以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株,按热休克方案进行转化。
4. 用无菌巴斯吸管挑取M13mp 噬斑,并置于上述每份培养物中,要注意确保琼脂块已玻转移。
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