细菌中制备基因组DNA实验
时间：2016-04-12 阅读：122
真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
| 实验方法原理 | 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。 |
|---|---|
| 实验材料 | 细菌 |
| 试剂、试剂盒 | TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB |
| 仪器、耗材 | 离心机摇床 |
| 实验步骤 | 1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态，取1.5 ml 的培养物离心2 min。
4. 加入100 μl 5 mol/l NaCl充分混匀，再加入80 μlCTAB/NaCl溶液，混匀，于65℃温育10 min。
5. 加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，离心4~5 min将上清液转人一个新管中，如果难以移出上清，先用牙签除去界面物质。
6. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心5 min，将上清液转入一只新管中。
7. 加入0.6体积异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，用一个封口的巴斯德管将沉淀转移至1 ml 的70%乙醇中洗涤。
8. 离心5 min，弃上清，用冻干机稍加干燥，重溶于的下100 μl TE缓冲液，每次酶切反应用10~15 μl。 |