微量蛋白胶回收试剂盒使用说明书
时间:2013-12-24 阅读:416
-
提供商
上海研拓生物科技有限公司 -
资料大小
6502 -
资料图片
-
下载次数
76次 -
资料类型
jpg -
浏览次数
416次
时间:2013-12-24 阅读:416
提供商
上海研拓生物科技有限公司资料大小
6502资料图片
下载次数
76次资料类型
jpg浏览次数
416次产品及特点 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法,它具有下列特点:
1. 简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2. 适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3. 回收率一般在50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
4. 跟后续的实验兼容,包括2-D电泳、质谱测序等。
规格及成分 成份 50次小盒包装
(90402-50)
溶液A 10 mL
溶液B 50 mL
微型离心管研磨杵
(CAT:80603A) 50只
使用手册 1份
运输及保存 常温运输,4℃保存(微型离心管研磨杵可以室温保存),有效期一年。
自备试剂 无
使用方法 1. 按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2. 切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率)。注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。
3. 将切下的胶块转移到1.5 mL塑料离心管中。
4. 用研磨杵充分将胶块压磨成尽可能细小的碎片。
5. 加入200 uL溶液A,4℃摇晃洗脱至少2-16小时(过夜)。此时将溶液B放在冰箱预冷。
6. 10,000 g离心10分钟,转移上清到新的离心管中,注意不要吸取碎胶。
7. 加入5倍体积的预冷的溶液B,摇晃混匀。
8. -20℃放置至少10-30分钟。
9. 室温12,000 g离心5-20分钟,弃上清。
10. 室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。