普鲁士蓝染色试剂盒（核固红法）

产品组成：

产品说明：

含铁血黄素（Hemosiderin）是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。

Perls 普鲁士蓝反应（Prussian blue reaction）又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内会间质内，主要显示三价铁盐。Perls 普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其染色原理为：亚铁氰化溶液使三价铁离子从蛋白质中被分离出来，三价铁与亚铁氰化反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁普鲁士蓝，所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁

化物是一种很稳定的化合物，在反应后可用红色染色剂进行复染，如核固红、伊红、中性红等。

Perls stain 常用于显示局部组织内各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。在判断含铁血黄素沉积时，用 Perls  反应可以得到证实，该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。该染色液稳定性好、可以保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。该染色液的复染液采用核固红，是经典、常用的复染液。

自备材料：

1. 10%的中性福尔马林

2. 系列乙醇

3. 蒸馏水

4. 4%的多聚甲醛

操作步骤（仅供参考）：

（一）石蜡切片染色

1、 组织固定于 10%中性福尔马林，常规脱水包埋。

2、 切片厚度 4um，常规脱蜡至水。

3、 蒸馏水水洗 1min。

4、 切片入 Perls stain（见注意事项 4），浸染 15-30m

5、 蒸馏水充分冲洗 2-5min。

6、 入核固红染色液，淡染细胞核 5-10min。

7、 自来水冲洗 1-5s。

8、 常规脱水透明，中性树胶封固。

（二）冰冻切片染色

1、 无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗 2～3min。

2、 染色、水洗、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

（三）细胞染色

1、 4%多聚甲醛固定 10～20min。

2、 自来水冲洗 2 次，每次 2min。

3、 蒸馏水冲洗 2 次，每次 2min。

4、 染色、水洗、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

染色结果：

阴性对照（可选）

取相同连续切片脱蜡至水。置于 5%的草酸中，孵育 2-6h 后，经 Perla stain，需要步骤同上。结果为阴性。

注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净。

2、组织固定常采用 10%的中性福尔马林，经普通福尔马林固定后，组织会有损伤。避免使用酸性固定剂，酪酸盐处理也会妨碍铁的保存。

3、整个操作过程中容器要干净，避免使用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。

4、Perls stain 染色时，应根据样本情况调整着色时间。

5、所有检查切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照，包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。

6、系列乙醇应经常更换新液。

7、 冰冻切片和细胞的染色，根据具体情况摸索实验条件。

8、 为了您的健康和安全，请穿实验服并戴一次性手套操作。