一、原理

 

在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL一60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂，经二甲基亚砜处理后的HL一60细胞按粒系途径定向成熟分化，同时细胞的增殖力降低，几乎全部细胞丧失了软琼脂中形成集落的能力。因此，这种方法可用于细胞分化的基础研究和临床*的疗效检验等方面。

 

二、操作

 

1．收集对数生长期的HL一60细胞，先按实验十三测定细胞活力，然后调整细胞浓度，制成300～1000活细胞/ml的细胞悬液。

 

2．取二个培养瓶每个瓶中加9ml调整好浓度的细胞悬液，然后各加入1ml 3％琼脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混匀。

 

3．用微量加样器吸140μl二甲基亚砜（MDSO），加到一个瓶中，充分混匀，为实验组，另一瓶不加DMSO，为空白对照组。

 

4．取一个16mm多孔培养板，每孔加1ml（35mm培养皿需加2ml）细胞琼脂悬液，勿有气泡，将实验组和对照组分两组加好，盖上盖并作好标记。

 

5．在室温放置20分钟使细胞琼脂悬液凝固。

 

以上各步骤均在无菌条件下进行。

 

6．然后移培养板或平皿于CO2培养箱中37℃进行培养。

 

7．培养7～10天，肉眼观察并计数细胞集落。

 

三、结果

 

以肉眼可见的细胞团（含500个以上细胞）作为计数集落的标准。对照组HL一60细胞在含0.3％的软琼脂培养基中生长良好，每个孔中可见有多个集落形成，而实验组HL一60细胞因经二甲基亚砜诱导分化，细胞在软琼脂中的集落形成明显减少。

 

四、集落的计数和计算

 

集落数=n孔中细胞集落数总和/n孔

 

集落形成率=集落数/接种培养细胞总数×100％