酿酒酵母感受态细胞的制备、转化

酿酒酵母感受态细胞的制备
 
（1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 mlYPD液体培养基，30℃，250 rpm培养过夜；
（2）测定过夜培养物的OD600值为3.0～5.0之间；
（3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2～0.4；
（4）在28～30℃摇床中继续培养3～6hr，使其OD600值达到0.6～1.0；
（5）于室温1500g离心5 min收集酵母细胞，弃上清；
用10ml洗液洗酵母细胞，随后于室温1500g离心5 min离心收集细胞，弃上清；
（7）用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞，以每管50μl分装。
 
酿酒酵母细胞的转化
 
（1）取50μl感受态细胞，再加入待转质粒各2μl，混匀；
（2）加入500μl 转化用溶液（PEG/LiAc,二甲亚砜），弹击管壁混匀；
（3）30℃水浴1hr,隔15min弹击管壁混匀；
（4）加入1毫升YPD培养液，30℃摇床培养1小时
（5）3500g离心5 min ，留沉淀，弃上清；
沉淀用150μl TE重悬，涂相应的SD平板；将平板倒置于30℃培养。