细胞因子和重组蛋白溶解必读（一）

我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20℃或-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
 
那么，应该如何进行正确的溶解呢？
 
下面我们以Recombinant Human IL-4 （重组人IL-4，产品编号：200-04）的说明书为例，对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。
 
拿到重组人IL-4的说明书后，您会发现有一段关于Reconstitution（重悬）的叙述，这段内容含有溶解相关的所有信息。
 
1. Centrifuge the vial prior to opening.
第1步：开盖前离心试剂管
 
PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中，为无菌包装。冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，所以在打开塑料瓶盖前，需将冻干粉通过离心收集到管底，以便用很小体积的液体即可将冻干粉*溶解。
 
有很多用户会问一个问题，即应该用多少转速、多长时间离心试剂管，才能达到良好的收集效果？
答：有些小型高速离心机（多为进口品牌）的面板上有一个Spin键，按了此键后，离心机会自动快速上升到其zui大速度（10000rpm或12000rpm），上升到zui高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。
 
但有些实验室没有这样的高速离心机，只有zui高转速为4000-4500rpm的离心机。这种情况下，需3000-3500rpm离心5min，也能达到类似的效果。
 
2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.
第2步：用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml，不可振荡。
 
这个步骤即为溶解步骤，非常重要。
 
1） 一定要用推荐的溶液重悬（或溶解）冻干粉
 
用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。此例中的重组人IL-4需用水溶解，而重组人IL-2 （产品编号：200-02）则需用100mM Acetic Acid （醋酸）溶解，重组人TGF-beta1 （产品编号：100-21）需用10mMCitric Acid （柠檬酸），pH3.0溶解，重组人FGF-basic（产品编号：100-18B）需用5mMTris，pH7.6溶解，重组人FGF-10（产品编号：100-26）需用5mMSodium Phosphate（磷酸钠），pH7.4溶解，重组IL-13（产品编号：200-13）需用20mMMHCl溶解。（注：即使同一重组细胞因子或蛋白，不同批次的溶解方法也可能有所不同，因此上面的叙述仅供参考。具体应该如何溶解应以相应批次的*说明书为准）。后续的文章中将对各种溶解液的配制方法进行详细的阐述，望继续关注。
 
经常有用户会问，为什么会有这么多种溶解方法？
答：我们知道，蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试，说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白*溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能*溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。
 
有不少用户没注意说明书上的描述，而是根据习惯，直接用PBS或培养液（1640或DMEM等）等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。这样做可以吗？
答：有时可以，要看具体情况。PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS，此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解，具体原因在上面已经叙述过。而有部分细胞因子，如重组人KGF（产品编号：100-19）和重组人FGF-23（产品编号：100-52）等，说明书上的溶解液即为1x PBS，此时用PBS溶解*没问题，那么用培养液溶解也是可以的，不过还是用先用PBS溶解，然后再用培养液稀释。