产品名称：骨成型蛋白4（BMP-4）免疫组化试剂盒

产品规格：50T/100T

免疫组化试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、兔等各种种属，咨询

该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性BMP-4抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的BMP-4一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，zui后加入 HRP-SA，形成抗原—特异一抗—*化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。

试剂盒所含试剂： 
试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）
试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL
试剂 C （*分装）已稀释的即用型 REG3 一抗（2.5ml）
试剂 D （*分装）*化羊抗兔 IgG 1 支
（浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml
试剂 E HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL
试剂 F DAB 显色液5ml

骨成型蛋白4（BMP-4）免疫组化试剂盒石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（ 建议方案 建议方案）：
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min）， 85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书*方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗涤（2×2min）直接进入第 5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37℃湿盒中孵育 30 min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。

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