细胞复苏的原则

　　在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。

细胞复苏的主要操作步骤

（1）佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。

（2）迅速放入 38℃水浴中，并不时摇动，在 1 分钟内使其*融化，然后在无菌下取出细胞。

（3）在 1000r/min速度下离心 5～10 分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度 1×109/L，置 37℃温箱静置培养，次日 更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代。或无需离心直接将细胞加入瓶中，并加入培养基贴壁培养 12～24 小时 后，充去上清，换入新鲜培养基继续培养。

细胞复苏的注意事项

　　在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过zui易受损的温度段（-5～0℃）。这样复苏的冻 存细胞存活率高，生长及形态良好。然而，由于冻存的细胞还受其他因素的影响，有时也会有部分细胞死亡。此时，可将不贴壁、飘浮在培养液上（已死亡）的细胞轻轻倒掉，再补以适量的新培养液，也会获得较为满意的结果。