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小鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)酶联免疫分析试剂盒​双抗体夹心法

时间:2024-04-01      阅读:36

小鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)酶联免疫分析试剂盒双抗体夹心法(检测未知抗原):1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

标本的采集及保存


1.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。


2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x 离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。


3.组织匀浆: 将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在20 mL PBS中于-20° C放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000x g离心5分钟,取上清即可检测。


4.细胞培养物上清:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。


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