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实时荧光PCR试剂盒常见问题:
一.没有扩增产物
.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间?
产品名称 | 实时荧光PCR试剂盒 |
规格 | 48T/盒 |
分类 | 实时荧光PCR试剂盒 |
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使用及效果:
PCR反应特点
() 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=0-2g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=0-6g)水平。能从00万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
?乙酰乙异丙酯 542-08-5 00次
delta-戊内酯 542-28-9 00µg Human Genomic DNA 4℃保存
2-氨基己二水合物 542-32-5 00µg Human Genomic DNA 4℃保存
3-氯丙 542-76-7 00µg Human Genomic DNA Mix 4℃保存
4-溴哌啶盐 54288-70-9 00µg Mouse Genomic DNA 4℃保存
4-氨苯乙乙酯 5438-70-0 30µg Human Culture Cell Genomic DNA 4℃保存
2-基-3-三氟基胺 54396-44-0 50次 TRAP Kit -20℃保存
亚硝丁酯 544-6- 600次 AFLP Kit(EcoRI-MseI) -20℃保存
2,6-二羟基-3-基-4-基啶 5444-02-0 5次 cDNA Library Construction Kit Dr. GenTLE Precipitation Carrier 4℃保存,3 M Sodium Acetate(pH5.2) 4℃保存,Spin Column 4℃保存,FALCON Tube 常温保存,E.coli Electro-Cells -80℃保存,SOC 4℃保存,其他组份-20℃保存
2-溴己酯 5445-9-2 套 One-Stop PCR-SSCP Pack 除PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存外,其余成分可以保存
4-硝苯乙乙酯 5445-26- 00次 RAPD PCR Kit 除PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存外,其余成分可以保存
4-甲氧基水杨酯 29588 50次 DOP-PCR Kit -20℃保存
十六烷 544-77-4 0次 SSH-PCR Kit -20℃保存
二基锌 544-97-8 0次 3'-RACE Kit -20℃保存
-溴-5-氯戊烷 5452-75-3 0次 5'-RACE Kit -20℃保存
去氧胆盐琼脂 规格: 0.2ml Rat glucocorticoid receptor-α,GR-α
中国蓝乳糖琼脂 规格: 0.ml Rat glucocorticoid receptor-β,GR-β
胆乳琼脂 规格: 0.2ml Rat glucocorticoid receptor,GR
庆大素琼脂 规格: 0.2ml Rat carbohydrate-deficient transferrin,CDT
米勒-海顿琼脂 规格: 0.2ml Rat glycogen synthase kinase,GSK
米勒-海顿肉汤 规格: 0.2ml Rat Glycogen phosphorylase BB,GP-BB
抗生素Ⅰ号培养基(Ph6.5~6.6) 规格: 0.2ml Rat Glycogen phosphorylase II,GP-II
抗生素Ⅰ号培养基(Ph7.8~8.0) 规格: 0.ml Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM
抗生素Ⅱ号培养基(Ph6.5~6.6) 规格: 0.2ml Rat ferritin,FE
抗生素Ⅱ号培养基(Ph7.8~8.0) 规格: 0.ml Rat Homocysteic acid,Hcy
抗生素Ⅲ号培养基 规格: 0.ml Rat Hyaluronic acid,HA
抗生素Ⅳ号培养基 规格: 0.ml Rat Hya]uronate binding protein,HABP
抗生素Ⅴ号培养基 规格: 0.2ml Rat Melatonin,MT/MLT
抗生素Ⅵ号培养基 规格: 0.ml Rat Dehydroepiandrosterone,DHEA
抗生Ⅶ号培养基 规格: 0.ml Rat Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7
特点:
. 实时荧光PCR试剂盒即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
用途:
. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。
2. 快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
3. 本产品A 型含电泳染料,PCR 反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。
5. 产物可直接用于T 载体克隆,不需要额外的加A 反应。
使用及效果:将本产品5 μL 与用户自备的模板,引物和水共5 μL 混合后,直接进行PCR反(PCR 参数由用户自己确定),反应结束后直接取0 μL 电泳检查扩增结果。