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常见问题:
一.没有扩增产物
.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间?
产品名称 | PCR扩增试剂盒 |
规格 | 48T/盒 |
分类 | PCR扩增试剂盒 |
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使用及效果:
PCR反应特点
() 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=0-2g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=0-6g)水平。能从00万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
?5-基-3(2H)-哒酮 54709-94-3 50gsu rhTFIIB 4℃保存
8-氧-3-氮杂二环[3.2.]辛烷 54745-74-3 00mg Poly r(A) -20℃保存
三氟甲烷镱水合物 5476-04-5 250mg 本产品是双链多聚脱氧核糖核苷,一条链是I,一条链是C,为冻干粉状态,加水或TE缓冲液即可溶解,可用于诱导动物产生干扰素,还可以用于在EMSA中作为非特异性的竞争剂。 Poly(I).Poly(C)
2-氯4-甲氧基溴苄,95% 54788-7-9 500U Taq DNA Polymerase -20℃保存
硼三异丙酯 5479-55-6 5000U Taq DNA Polymerase -20℃保存
2,6-二甲氧基萘 5486-55-5 00U
-苄基-3-羟基氮杂环丁烷 5488-3-9 00U Hot Start Taq DNA Polymerase -20℃保存
4,5,6,7-四氢噻吩并[3.2-c]啶 54903-50-3 00U Blood-Direct Taq Polymerase -20℃保存
4-氯-7-氮杂吲哚 55052-28-3 500U Long-Taq DNA Polymerase -20℃保存
*内酯 5508-58-7 250U Tth DNA Polymerase -20℃保存
6-氨基青霉烷 55-6-6 250U
三(2-呋喃) 558-52-5 250U
2-氨基-5-基吡 552-58-4 00U Pfu DNA Polymerase -20℃保存
邻基苄 552-45-4 00U
4-氯-3-氟苯甲 5527-95-7 250U Phusion DNA Polymerase -20℃保存
煌绿乳糖胆盐肉汤 规格: 0.ml Rat Pentosidine
胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础 规格: 0.ml Rat intercellular adhesion molecule ,ICAM-
溴甲紫葡萄糖蛋白胨水培养基 规格: 0.2ml Rat intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2
溴甲紫葡萄糖肉汤 规格: 0.ml Rat intercellular adhesion molecule 3,ICAM-3
胰蛋白胨大豆肉汤 规格: 0.ml Rat Cytochrome-C,Cyt-C
胰酪胨大豆琼脂 规格: 0.ml Rat cytochrome P450,CYP450
胰胨大豆琼脂斜面 规格: 0.ml Rat cytochrome P450 2E,CYP2E
碱性蛋白胨水 规格: 0.ml Rat Cyclin-D
孟加拉红琼脂 规格: 0.ml Rat Cyclin-D2
酵母粉葡萄糖氯素琼脂 规格: 0.2ml Rat Cyclin-D3
Candida Elective 琼脂 规格: mg Rat Fibronectin,FN
DTM培养基 规格: 0.ml Rat plasmin-antiplasmin complex,PAP
DRBC琼脂 规格: 0.ml Rat plasminogen activator inhibitor,PAI
WORT琼脂 规格: 0.ml Rat plasminogen activator inhibitor ,PAI-
WORT肉汤 规格: 0.2ml Rat Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI
特点:
. PCR扩增试剂盒即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
用途:
. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。
2. 快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
3. 本产品A 型含电泳染料,PCR 反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。
5. 产物可直接用于T 载体克隆,不需要额外的加A 反应。
使用及效果:将本产品5 μL 与用户自备的模板,引物和水共5 μL 混合后,直接进行PCR反(PCR 参数由用户自己确定),反应结束后直接取0 μL 电泳检查扩增结果。