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13510 Amplite 基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒
- 型号
- 13510
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西安百萤生物科技有限公司是一家专注从事生物、化学试剂及其试剂盒；主要以荧光探针，分子探针，核酸/蛋白质标记、细胞检测等技术和产品为研发核心，产品广泛应用于基因合成、细胞检测、活体示踪，抗体标记、新药筛选等领域。
美国AAT Bioquest公司。长年以来百萤生物与AAT Bioquest互补优势，为国内外广大用户提供光谱检测，底物显色，荧光发光技术等全系列解决方案。近年来，百萤生物已与多家药企、CRO公司、众多高校及科研单位建立了长期稳定的合作关系；我们的服务宗旨：不断创新，为广大科研用户提供服务；主要分为以下几个产品线：
开发和生产荧光标记探针和发光探针。这些荧光标记探针和发光探针是用于标记生物大分子例如，蛋白质，核酸，碳水化合物的主要工具；
检测蛋白质，核酸和活细胞荧光和荧光探针；
新型各种酶活性荧光探针和发光探针(特别是用与研究蛋白酶，蛋白激酶和氧化还原酶荧光标记探针和发光探针)；
开发用于分子信号转导研究试剂和试剂盒；
生物钙膜电位探针和神经生物学荧光标记探针和发光探针；
详细信息
Amplite 基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测MMP的试剂盒，基质金属蛋白酶（MMP）构成锌依赖性内肽酶家族，其在细胞外基质内起作用。 这些酶负责结缔组织的分解，并且在骨重塑，月经周期和组织损伤的修复中是重要的。虽然很难评估MMP对某些病理过程的确切贡献，但MMP似乎在关节炎的发展以及癌症的侵袭和转移中起关键作用。
我们的Amplite 通用荧光MMP活性测定试剂盒使用Tide Fluor 2（TF2）/ Tide Quencher 2（TQ2）荧光共振能量转移（FRET）肽作为通用MMP活性指示剂。 它旨在检查MMP酶的一般活性并筛选MMP抑制剂。 在完整的FRET肽中，TF2的荧光被TQ2猝灭。 在通过MMP切割成两个单独的片段后，回收TF2的荧光。 TF2探针具有优异的荧光量子产率和更长的波长，比EDANS / Dabcyl FRET底物灵敏得多。 其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm处轻松读取。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的Amplite 基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒
96孔板测定示例
概述
添加适当的对照或测试样品（50μL）
预孵育10-15分钟
添加MMP Green™底物溶液（50μL）
孵育0分钟（用于动力学读数）或30分钟至1小时（终点读数）
在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光强度
注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
操作方法
1.根据需要制备含有生物样品的MMP。
2.pro-MMPs：
2.1制备2mM APMA工作溶液（2X）：用1：500稀释1M APMA（组分B）和测定缓冲液（组分C），得到2mM APMA工作溶液（2X）。
注意：APMA属于有机汞。 小心轻放！ 根据当地法规处理。
2.2用APMA包埋MMPs：用等体积的2mM APMA工作溶液（2X，来自步骤2.1）孵育含有MMP的样品或纯化的MMPs。 有关孵育时间，请参阅说明书中的附录I. 在实验之前立即MMP。
注意1：将含酶样品保存在冰上。 避免剧烈涡旋酶。长时间储存活化酶会使酶失活。
注意2：对于酶活化，优选在较高蛋白质浓度下活化。后，您可以进一步稀释酶。
3.准备工作解决方案：
3.1制备MMP Green™底物工作溶液：用1：100稀释MMP Green™底物（组分A）和测定缓冲液（组分C），如说明书中表1所示。
3.2制备MMP稀释：如果使用纯化的MMP，则在测定缓冲液（组分C）中将MMP稀释至合适的浓度。
注意：Pro-MMP需要在使用前（参见步骤2.2）。 避免剧烈涡旋酶。
3.3制备抑制剂和化合物稀释：如果您正在筛选MMPs抑制剂，请根据需要稀释已知的MMPs抑制剂和测试化合物。
4.根据说明书中的表2和表3在96孔微孔板中建立酶促反应：
5.运行酶反应：
5.1如果您正在筛选MMPs抑制剂，则将培养板在酶反应（例如25°C或37°C）的所需温度下预孵育10-15分钟。
5.2将50μL（96孔）或20μL（384孔）MMP Green™底物溶液（来自步骤3.1）加入到测定板的样品和对照孔中。充分混合试剂。
5.3用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光强度。
动态读数：立即开始测量荧光强度，每5分钟连续记录数据30至60分钟。
终点读数：在室温下孵育反应30至60分钟，如果可能，避免光照。 充分混合试剂，然后测量荧光强度。
