大鼠骨髓来源的内皮祖细胞体外培养
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伊莱博生物科技(上海)有限公司(简称,伊莱博生物),总部位于上海市长江软件园,2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心,是一家以生命科学研究为基础,专注于研究成果转化及技术服务的创新型高科技企业。主要致力于为科研人员及机构提供专业的技术团队和实验平台,建立包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学和动物实验等学科的研究服务体系。
伊莱博生物拥有丰富的研究经验,具备完善的系统化管理能力和科研服务体系。目前已自建细胞、分子、病理等实验平台近1000平方米,拥有的仪器设备、细胞库、样本保存库等。动物实验中心近1800平方米,可满足同时饲养清洁级和SPF级动物。核心实验技术团队主要来自中国科学院大学、复旦大学、上海交通大学等重点高校及科研机构,能够为客户提供研究方案策划、项目实施及项目深度分析等方面的技术支持。公司目前参与研究项目已经涵盖心脑血管、肿瘤、内分泌、生殖、免疫、神经等诸多领域。
为了响应大力发展基础研究的号召,推动生命科学领域的进步,伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势,提供培训服务。通过实验理论培训和实践相结合,充分了解科学研究和实验操作的全过程,培训规范的实验操作、分析问题和解决问题的能力,分层次培养科研人才,为其今后的科研工作奠定坚实的基础。
因为专业,所以值得信赖;因为专注,所以高速发展;坚持“诚信创新,互利共赢”的原则;朝着“解决科研问题”这一目标,伊莱博人将通过自身的努力,与一线科研人员共同推动生命科学的快速发展!
1. SD大鼠,250g,通过颈椎脱位处死大鼠,浸入75%乙醇浸泡5分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。
2. 打开皮肤,暴露、收集股骨,无菌状态下移除附着的肌肉和组织。
3. 并转移股骨至预冷含双抗的PBS中,洗涤三次。冰上操作。
4. 切断股骨骨骺, 使用5mlPBS,1ml注射器针头冲洗,冲洗液由棕色变成粉红色即可(股骨变白)。冲洗后,用1ml注射器吹打3-5次。
5. 70um滤网过滤,弃去筛网。使用 15ml 离心管,先加入分离液,然后缓慢加入滤过的悬液。20℃环境下,600g 离心 25min。
6. 离心后,离心管中液体由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
7. 小心吸取离心管中的,环状乳白色单个核细胞层,转移到新离心管中,加入 5-10ml 洗涤液,混匀细胞。400g,离心 10min。
8. 弃去上清,用吸管吸取 5ml 清洗液重悬所得细胞。 250g,离心 10min,弃去上清。 再用M199wq培养基(含10 ng/mL VEGF,1 ng/mL b-FGF,1 ng/mL EGF,20%胎牛血清、1%双抗)清洗一次,弃去上清,M199wq培养基重悬细胞。250g,离心 10min,弃去上清。M199wq培养基重悬细胞,计数。
按3×106/孔种入纤连蛋白包被过的24孔板,每3天换一次培养基,以去除非贴壁细胞,持续诱导培养2-3周。