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流式ROS检测技术服务
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伊莱博生物科技（上海）有限公司（简称，伊莱博生物），总部位于上海市长江软件园，2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心，是一家以生命科学研究为基础，专注于研究成果转化及技术服务的创新型高科技企业。主要致力于为科研人员及机构提供专业的技术团队和实验平台，建立包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学和动物实验等学科的研究服务体系。
伊莱博生物拥有丰富的研究经验，具备完善的系统化管理能力和科研服务体系。目前已自建细胞、分子、病理等实验平台近1000平方米，拥有的仪器设备、细胞库、样本保存库等。动物实验中心近1800平方米，可满足同时饲养清洁级和SPF级动物。核心实验技术团队主要来自中国科学院大学、复旦大学、上海交通大学等重点高校及科研机构，能够为客户提供研究方案策划、项目实施及项目深度分析等方面的技术支持。公司目前参与研究项目已经涵盖心脑血管、肿瘤、内分泌、生殖、免疫、神经等诸多领域。
为了响应大力发展基础研究的号召，推动生命科学领域的进步，伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势，提供培训服务。通过实验理论培训和实践相结合，充分了解科学研究和实验操作的全过程，培训规范的实验操作、分析问题和解决问题的能力，分层次培养科研人才，为其今后的科研工作奠定坚实的基础。
因为专业，所以值得信赖；因为专注，所以高速发展；坚持“诚信创新，互利共赢”的原则；朝着“解决科研问题”这一目标，伊莱博人将通过自身的努力，与一线科研人员共同推动生命科学的快速发展!
详细信息
流式ROS检测技术服务
流式ROS检测技术服务流程：
01选择荧光探针
常用的荧光染料是DCFH-DA，它能够进入细胞并在细胞内被酯酶水解成DCFH。DCFH随后可以被细胞内的活性氧氧化，生成发荧光的DCF。
02DCFH-DA是一种用于检测活性氧ROS的荧光探针，全称为2,7-二氯荧光素二乙酸酯。其工作原理为：DCFH-DA本身没有荧光，但可以自由穿过细胞膜，一旦进入细胞，它会被细胞内的酯酶水解成DCFH，由于DCFH无法穿过细胞膜，因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH，生成有荧光的DCF，且荧光强度与ROS水平成正比。通过荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等设备，在激发波长480nm和发射波长525nm下检测荧光信号。
03步骤装载探针对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
