蛋白胨细胞培养基冷冻保存及神经胶质细胞培养的步骤

    培养蛋白胨细胞时为防止以下问题，细胞将做冷冻保存：*、株化细胞产生性状转变。第二、污染。第三、株化细胞之增殖或生理特性有特定之限制，只能在一定的代数范围内进行增殖培养或进行特定实验。目前可能解决这些困难的方法其中之一是细胞冷冻保存法，将冷冻细胞储于冷冻管中，将其中一部分拿出来做一些必要的检查，其它的冷冻细胞则在需要时拿出来解冻，用来进行实验。本方法亦可节省继代培养时所花费的劳力、物力，并可防止培养中经常发生意外事故，丧失细胞珠。因此冷冻保存法为细胞培养研究上之基本技术之一。

　　1、准备2 x 107cells/ml的细胞悬浮液。

　　2、冷冻用培养基(2倍)：以微温水溶解DMSO，在培养基中混合为15% (v/v)。这是DMSO的二倍浓度之溶液。必须在进行实验前在行配制，配好后放在冰箱中，使用量必须和细胞悬浮液的量相等；使用时维持在4℃。

　　3、分装：在冷冻管管中分别加0.5ml (1/2冷冻管体积)冷冻用培养基(2倍)及2 x 10(7次方)cells/ml的细胞悬浮液；等量混合。将盖子扭紧后，在管中部贴上胶带密封。

　　4、记载卷标：用抗冻marker pen在冷冻管上写明细胞名称、代数、冷冻的年，月，日等所需要的项目。

　　5、放进冷却的保利龙容器中，而在- 80℃的超低温槽中放置一个晚上。

　　6、放进液态氮容器中及保存：在支持棒上装上冷冻管，迅速地放进容器内。

    蛋白胨神经细胞（神经元〕不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象，但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。

　　人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等诱发转化。

　　蛋白胨神经胶质细胞培养方法如下：

　　1、从手术室无菌取脑髓灰质或白质后，仔细剥除脑膜、血管和纤维成分，置Hanks液中漂洗一、二次。

　　2、置于30—50倍体积的Hanks液中，此时脑组织比较柔软，反复吹打即制成细胞悬液。

　　3、把悬液注入离心管室温中直立5—10分钟后，细胞或细胞团快自然下沉，脂肪等杂物易漂浮，可吸除上层、反复二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎块并获较多细胞成分。

　　4、在沉降物中加入适量培养液，通过纱网成纱布过滤，计数并调整细胞密度。

　　5、接入培养瓶或皿中，置5%CO2温箱中培养。

　　该细胞适应环境过程较长，接种后贴壁较慢。贴壁后短期内也可能不见细胞分裂现象，然而一旦生长后即能迅速进入旺盛的增殖状态。细胞传代可以0.25%*消化处理。