一、方法原理简介

标准依据：国家《中华人民共和国生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）中增加了贾第鞭毛虫和隐孢子虫的微生物指标，要求为<1个/10L。该产品运用的检测方法是国标规定的“两虫”IFA 检测方法，采样淘洗及 IMS 系统均符合国标及美国 EPA1623 的标准方法。

具体步骤如下：过滤采样→淘洗浓缩→ IMS 磁分离→ IFA 染色→显微镜检

二、主要特点及技术*性说明  

（一）、两虫系统设计的标准性、合理性、适用性

1、 美国UniBest公司Compact 型两虫检测仪 IFA 染色系统符合并优于中国国标。

2、  美国UniBest公司Compact 型两虫检测仪 IMS 免疫磁分离系统采用国标 GB/T 5750.12-2006 方法。

3、 美国UniBest公司Compact 型两虫检测仪过滤系统采用符合国际技术规范规定的一次性滤囊。

（二）、两虫系统的可靠性、稳定性

1、 过滤步骤回收率 ≥99%

2、 淘洗步骤回收率 ≥80%

3、 IMS 免疫磁分离步骤回收率 ≥90%

4、 总回收率（过滤、淘洗、磁珠分离、染色）≥ 35%

5、 检测结果相对标准差 ≤10%

6、 镜检率：贾第鞭毛虫孢囊 99%检出，隐孢子虫卵囊 99%检出

7、 检测可处理高浊度水样：可达 100（NTU）

8、 试剂盒配备预制的阳性对照玻片，确保试剂盒的有效活性；*避免误检，确保检测的准确性。

9、 保质期长：美国 UniBest 优佰达公司 ClearScan 系列两虫 IFA 染色试剂保质期长达 24 个月，是业内保质期更长、性能更稳定的 IFA 试剂。

（三）、两虫系统的*性、准确性、经济性

1、 标记单克隆抗体：包括抗隐孢子虫抗体和抗贾第鞭毛虫单克隆抗体的异硫氰酸荧光素（FITC），系一种的免疫球蛋白M五聚体，由5 个FITC结合点位同时标记一个抗体，具有显著的明亮荧光效果，该抗体是国标推荐的染色试剂。

2、 提供固色液：固色液使显色更稳定，几天后仍不褪色镜检效果依然清晰。

3、 美国 UniBest 优佰达公司 ClearScan 系列 IFA 染色试剂已添加专用复染液，可使聚焦更准确，计数更清晰准确。

4、 提供阳性对照玻片：试剂盒（25 次测试量）中含一个预制的载玻片供时时自检，使测试更便捷更省时。

5、 采样过滤系统采用美国 EPA1623 标准推荐的一次性滤囊，*杜绝样品交叉污染；可以在不更改所有实验仪器、试剂及器具的情况下*替代其它品牌的一次性或多次使用的过滤器具。

6、 美国 UniBest 公司 ClearScan 系列两虫检测系统，日常检测运行成本与市场同类产品相比具有明显优势。

三、系统概述

（一）、采样淘洗浓缩系统

采用符合中国国标及美国 EPA 要求的囊式过滤器对水样进行过滤，将孢囊、卵囊及其他物质收集在过滤器上，该过滤器可用于实验室及野外现场水样过滤。滤囊利用两虫专用淘洗缓冲液将拦截在滤囊上的两虫振荡洗脱下来，最后进行离心收集。                        

（二）、免疫磁分离系统（IMS）

IMS 过程使用美国 UniBest 优佰达公司的 ClearScan 系列两虫专用免疫磁分离试剂盒，利用带有特异性抗体的磁珠与样品中的贾第鞭毛虫和隐孢子虫特异性抗原相结合，在磁场中高效选择性分离，该步骤可保证检测的特异性。  

（三）、IFA（间接免疫荧光）染色系统

使用美国 UniBest 优佰达公司的 Cellabs 型检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫诊断专用试剂盒（内含的免疫球蛋白 M 五聚体 FITC 单克隆抗体）对水样中的两虫（抗原）进行荧光标记，同时利用细胞核染色剂 DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）与细胞核中的双链 DNA 结合发出荧光，排除假阳性反应，从而提高镜检准确性。

（四）、显微镜检系统

使用两虫专用荧光显微镜对着色样本进行检测，观察样本，对符合孢囊和卵囊大小、外形、荧光特性的被观察物依据国标 GB/T 5750.12-2006 中贾第鞭毛虫孢囊与隐孢子虫卵囊的特征（见尾页）进行定性、定量分析。

四、技术参数

五、备注

按照国标 GB 5750 12-2023《生活饮用水标准检验方法》规定，“两虫”检测系统大致分为以下五个步骤，分别是：过滤采样→ 淘洗浓缩→ IMS 磁分离→ IFA 染色→ 显微镜检，其中过滤采样仅仅是“两虫”检测环节中的一个非核心步骤，实验方法中所提到的过滤器的型号并不能断章取义地代表两虫检测的采样方法实质，更不能以偏概全地代表两虫检测全过程的检测方法；过滤采样器只是收集样品的工具，而并非两虫检测的关键技术，并且随着两虫采样技术的进步，只要使用的两虫采样器达到样本采集的目的即可；如果仅仅用一个过滤采样器的型号来自称是国标甚至国际标准的实验方法，就会混淆了两虫检测方法以及国家标准的本来实质。

美国 UniBest 优佰达集团的“两虫”检测系统，采用的是一次性滤囊的过滤采样方法，且性能指标不仅满足而且优于国标（国标要求滤囊的孔径为 1μm，我们的孔径为0.45μm，更小的孔径，更, 能, , , 保证两虫的 99%*截留, ）。

“两虫”检测的核心步骤在于 IFA（间接免疫荧光）染色，美国 UniBest 优佰达集团“两虫”染色试剂是国标核心步骤的染色试剂。