AL107 粮食农yao速测卡

1、原理

丁酰胆碱酯酶对有机磷农yao高度敏感，根据酶活性的抑制情况就可以检测到微量的农yao残留。丁酰胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷类农yao对丁酰胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有过量有机磷类农yao的存在。

含硫类有机磷杀虫剂是粮食生产中比较常用的农yao，多数毒性较高。采用溴制剂（农残速测增强剂）对粮食样品提取液进行氧化前处理，可以显著降低这类农yao的检出限，提高丁酰胆碱酯酶对这类农yao的检测灵敏度。

2、试剂

2.1粮食农yao速测卡：固化有丁酰胆碱酯酶和靛酚乙酸酯显色剂的酶试纸（简称速测卡）。

2.2pH 7.8磷酸缓冲液：随产品附送,每包用1000 mL纯化水溶解。

2.3农残速测增强剂（溴制剂）：随产品附送。

3、仪器

3.1农yao残留速测仪。

3.2样品粉碎机。

3.3砻谷机。

3.4电子天平（0.1 g）。

3.5超声波清洗仪。

3.6低速离心机。

3.7可调移液器（10～100 μL，1～5 mL）。

4、分析步骤

4.1样品处理

4.1.1把粮食样品粉碎至95%以上通过20目筛（稻谷应先脱壳），称取10 g样品，倒入提取瓶，加入30 mL pH 7.8的磷酸缓冲液混匀。

4.1.2用超声波清洗仪超声5 min，待溶液分层后取上层提取液2 mL于试管内，4000 r/min离心1 min；取1 mL上清液，加入50 μL农残速测增强剂，备用。

4.2检测过程

4.2.1将农yao残留速测仪接通电源，开机预热，温度达到40℃后，设定预反应时间为10min，显色时间为3min。

4.2.2取出粮食农yao速测卡，先对折一下形成折痕，然后插入农yao残留速测仪的卡槽中（白片在下，红片在上）。先取80 μL pH 7.8磷酸缓冲液加到空白对照卡的白色yao片上，然后依次取80 μL粮食样品提取液分别加到其余的白色yao片上，按下开始键，预反应10 min。

4.2.3听到鸣音提示后将农yao残留速测仪上盖合下来，使白色yao片和红色yao片充分接触，发生显色反应3min。

4.2.4再次听到鸣音提示后将农yao残留速测仪上盖打开，观察显色反应的结果，以空白对照卡所显蓝色作为标准，判断粮食样品的检验结果。

4.2.5如果没有条件配置农yao残留速测仪，也可以直接用手代替仪器进行检测，放置10 min预反应后，用手对折捏3 min，打开观察结果。用手操作，容易受环境温度和各人手温影响。

5、结果判定

结果以丁酰胆碱酯酶被有机磷类农yao抑制（为阳性）、未抑制（为阴性）表示。

与空白对照卡比较，粮食样品速测卡的白色yao片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。

对测定结果为阳性的样品，应重复检验2～3次，进一步通过其他分析方法确定具体农yao种类和含量。

如果空白对照卡没有显示蓝色，说明检测不正常，可能是速测卡失效或者环境中有相关农yao和干扰物质存在，或者是加样的量不够，需要排除有关问题后再进行检测。

6、附则

6.1粮食农yao速测卡技术指标

6.1.1灵敏度指标：粮食速测卡对部分农yao的检出限见表1。

表1 部分农yao的检出限

6.1.2符合率：检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法等方法确证，阳性结果的符合率应达到80%以上。

7说明

7.1丁酰胆碱酯酶速测卡对有机磷和氨基甲酸酯类农yao非常敏感，测定时如果附近喷洒农yao或使用卫生杀虫剂，以及操作者或器具沾有微量农yao，都会造成对照和测定yao片不变蓝。

7.2红色yao片与白色yao片叠合反应的时间以3min为准，3min后蓝色会逐渐加深，24h后颜色会逐渐褪去。

7.3农残速测增强剂具有腐蚀性、刺激性和挥发性，使用过程中要注意及时拧紧瓶盖。

AL107 粮食农yao速测卡