酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)测试盒_微量法

测定方法：微量法

产品规格：100管/96样

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于Ser水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)测试盒_微量法

测定原理：

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固篮显色；在450 nm光吸收增加速率，计算CarE活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体15mL×2瓶， 4℃保存；

试剂三：粉剂×2支， 4℃保存，临用前取1支试剂三，加0.6ml无水乙醇充分溶解；

试剂四：粉剂×2支，-20℃保存，临用前取1支试剂四，加少量试剂二溶解；

工作液配制：临用前配制，向1瓶试剂二中，加入溶解后的试剂三和试剂四各1支，充分溶解，过滤，4℃避光保存，可用1周。

粗酶液提取：

细菌、细胞样品制备

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。

2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。

3、液体：直接测定

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到450 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL蒸馏水和200μL试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1

4. 测定管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL上清液和200μL试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3

注意：空白管只需测定一次。