糖原系列_UDPG焦磷酸化酶UPG测试盒_微量法

测定方法：微量法

产品规格：100管/96样

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。

糖原系列_UDPG焦磷酸化酶UPG测试盒_微量法

测定原理：

UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板

试剂组成和配制：  

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存。

酶液提取：

1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。

3.液体：直接检测。

测定操作：

1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2.取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL试剂一，20μL试剂二，20μL试剂三，20μL试剂四，20μL试剂五，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，△A=A2-A1