金银花为名贵中药材之一，具有清热解毒，疏散风热等功效，自古以来，就被民间广泛使用。金银花叶作为金银花药材的一种副产物，产量较大，但长期以来都作为非药用部分而未得到利用。研究表明，金银花和金银花叶中都含有一定量的黄酮，这些黄酮类物质具有抗炎、抗高血压、抗癌等药理作用，是金银花及叶中的主要活性成分之一。目前黄酮类化合物的测定方法有紫外分光光度法、铝盐显色分光光度法、梯度洗脱反相高效液相色谱法等，而且主要以分光光度法为主测定总黄酮的含量。应用高效液相色谱法测定的还较少。本实验采用反相高效液相色谱法，直接对金银花及叶中的黄酮类物质槲皮素和木犀草素进行分离与测定，方法简便快速，结果可靠，为金银花及叶中黄酮类物质的研究提供了参考。

 仪器准备

仪器简介

    LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。

应用领域

化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析

供试品溶液制备：

分别称取5g经过干燥粉碎的金银花和金银花叶各一份，用100ml甲醇在40℃超声提取30min，过滤，减压浓缩，浓缩液用石油醚除杂，然后用甲醇定容至25ml容量瓶，即得到金银花和金银花叶的供试品溶液。

色谱条件：

测定结果：

分别对槲皮素和木犀草素的对照品溶液在200-900nm进行紫外扫描，二者的**大和次大吸收峰分别在350nm和255nm，由于在350nm吸收**强，且干扰较少，故选用350nm作为检测波长。在实验时，用甲醇超声提取金银花和金银花叶中的黄酮类化合物，然后过滤，减压浓缩，浓缩液用石油醚除杂后定容检测，这样得到的色谱峰形好，杂质峰较少，比直接将浓缩液定容检测效果要理想。

本研究表明，采用反相高效液相色谱法直接对金银花及叶中的黄酮类物质槲皮素和木犀草素进行分离与测定，此方法简便快捷，结果可靠。