葡萄糖氧化酶试剂盒说明书
时间：2021-06-02 阅读：866
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上海信帆生物科技有限公司 -
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葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前取 2-3 个预期差异的样本做预测定
测定意义
GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生 H2O2，
是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
测定原理
GOD 催化产生 H2O2，过氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，
在 500 nm 有特征吸收峰，颜色深浅与 GOD 活性成线性关系。
试验中所需的仪器和设备
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸
馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
缓冲液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂 4℃
保存一个月；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂 4℃
保存一个月；
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一和试剂二的配制：参见试剂的组成和配制。
3、煮沸样本的准备：取 500μL 样本至新的 EP 管中，95℃水浴 10min，冷却至室温后，8000g
4℃离心 10min，取上清作为对照管的煮沸样本待测。
4、测定操作表
试剂（μL） 对照管 测定管
样本 250
煮沸样本 250
试剂一 375 375
试剂二 375 375
混匀，35'C 保温 15min 后，于 500nm 波长处读取吸光度。ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测
定管需设一个对照管。GOD 活力单位的计算
1、标准条件下测定回归方程为 y = 2.8348x - 0.0169；x 为 H2O2标准品浓度（μmol/mL），y
为ΔA。
1、血清（浆）GOD 活力的计算
单位定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷V 样÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、细菌、细胞或组织 GOD 活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(V 样×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V 反总：反应体系总体积，0.625mL； V 样：加入样本体积，0.25mL；V 样总：加入提取
液体积，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万