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血浆纤维蛋白检测(Fibronectin)ELISA试剂盒
面议血管性血友病因子抗原检测(vWF-Ag)ELISA试剂盒
面议血管性血友病因子活性检测(vWF-Actibind)ELISA试剂盒
面议血管性血友病因子功能检测(vWF-CBA)ELISA试剂盒
面议血管舒张素(BK)ELISA试剂盒
面议血管生长素(Angiogenin)ELISA试剂盒
面议血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)ELISA试剂盒
面议血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)ELISA试剂盒
面议血清C-肽(C-P)ELISA试剂盒
面议血肽(SOT)ELISA试剂盒
面议血栓海绵蛋白(TSP)ELISA试剂盒
面议牛组织蛋白酶(Cath)ELISA试剂盒
面议大鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒ELISA试剂盒规格:48T/96T
ELISA中常见问题及解决方法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。在操作过程中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给实验师带来一些启发,提高试验质量。
大鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法
1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样 可能原因: 1)血清或血浆标本分离不好即进行加样; 2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法: 1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育 可能原因: 1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*; 2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法: 1) 贴封片或加盖; 2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板 可能原因: 1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法: 1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; 2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 显色 可能原因: 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂; 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法: 1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流; 3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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