产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

产品中文名称：CFDA SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒

规格：200T×5/200T×10

货号：EY-01X8526
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

•  CFDA SE探针可以在几代中很好地保留在活细胞中。

•  探针会转移到子细胞，但不转移到群体中的相邻细胞。

•  兼容流式细胞仪或荧光显微镜等检测方法

• 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。

保存建议:收到货后，请避光保存于-20℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为12个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

5(6)-CFDA, SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞示踪染料，不仅可用于细胞增殖的体外实验，还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester，CFSE），可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE 还可自发并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的 5(6)-CFDA, SE 通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经 5(6)-CFDA, SE 标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如 PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也很均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1 通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2 的荧光强度），二次（1/4 的荧光强度），三次（1/8 的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。5(6)-CFDA, SE 可检测分裂次数多达八次甚至更多。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠仙台病毒(Sendai)检测试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)检测试剂盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenheparansulfate,HS检测试剂盒鸡类肝素(HS)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CDK4蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠热休克蛋白70(HSP-70)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠血管紧张素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

小鼠血管紧张素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

大鼠 C 反应蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 ADI

猪组织因子(TF)ELISA 试剂盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)检测试剂盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人载脂蛋白H

溴脱氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩尔)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit猪髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒规格：96T/48T

CFDA SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。