产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Caspase-3 Assay Kit (Colorimetric)

产品中文名称：Caspase-3 活性分析试剂盒（比色法）

规格：20T/50T/100T

货号：EY-01X8536
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

•  简单，优化的实验方法。

•  操作方便快捷。

•  检测早/中期的细胞凋亡。

保存建议:请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为12个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

Caspase全称为含半的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一类蛋白酶家族，成员较多，在人类，已经鉴定了11种不同的caspase，根据其蛋白酶序列的同源性可分为3个亚族：Caspase-1亚族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亚族包括Caspase-2、9； Caspase-3亚族包括Caspase-3、6、7、8、10。起细胞凋亡执行者作用的是caspase3,6,7。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

Ⅱ(F2)重组蛋白 Recombinant Coagulation Factor II (F2)

EPHA4 Protein Human 重组人 EphA4 蛋白

NTRK2重组人 TrkB / NTRK2 蛋白 Protein

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CGA重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白 Protein

小鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human neurotensin () ELISA Kit 人神经降压素()检测试剂盒

Humanplateletbasicprotein,PBPELISAKit 人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

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植物0脂酶D(PhospholipaseD)总活性比色法定量检测试剂盒20次

humanversican/PG-M/PG-350,VSELISAKit人多功能蛋白聚糖(VS)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠白细胞介素25（IL-25）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠白细胞活化黏附因子(ALCAM)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠白细胞分化抗原30(CD30)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠白三烯E4（LTE4）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

大鼠白介素2可溶性受体α链(sIL-2Rα/CD25)检测试剂盒 ，英文名： sIL-2Rα/CD25 ELISA Kit

Mouse ierleukin -5 (IL-5) ELISA Kit 小鼠白介素-5(IL-5)检测试剂盒

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CLIAKitforINH-AELISAKit大鼠抑制素A

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ELISAKitf-βCG大鼠游离β绒毛膜

Caspase-3 活性分析试剂盒（比色法）NTRK2重组人 TrkB / NTRK2 蛋白 Protein

Ⅱ(F2)重组蛋白 Recombinant Coagulation Factor II (F2)

CGA重组人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白 Protein

EPHA4 Protein Human 重组人 EphA4 蛋白

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。