产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

产品中文名称：双荧光素酶报告基因检测试剂盒

规格：100T/1000T

货号：EY-01X8545
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

• 发光强度高。

• 检测灵敏度高，测定样品的线性范围宽。

• 操作便捷，读值稳定，速度快。

• 对各种培养基兼容性强。

保存建议:-20℃，避光保存12个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）可以催化萤火虫萤光素（Luciferin）生成氧化萤光素（Oxyluciferin），在萤光素被氧化的过程中，会产生光信号。在氧气存在的条件下，海肾萤光素酶（Renilla luciferase）可以催化腔肠素（Coelenterazine）氧化成肠酰胺（Coelenteramide），在腔肠素氧化的过程中也会产生光信号。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的产品：

AATK peptide 细胞凋亡关联酪激酶抗原 0.5mgAATK peptide 细胞凋亡关联酪激酶抗原

IFNL1 Protein Human 重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

OMG重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签) Protein

COLEC12 Protein Rat 重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白

CXCL10重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白 Protein

豌豆凝集素(PSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat cardiac anscription factor GATA4 大鼠心肌转录因子GATA4

Humanai-insulieceptoraibody,AIRAELISAKit 人抗胰岛素受体抗体(AIRA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCreatineKinaseMBisoenzyme,CK-MB检测试剂盒人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)检测试剂盒规格：96T/48T

组织C-TAK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProstaticAcidPhosphatase，PAPELISAKit人前列腺酸性0酸酶(PAP)检测试剂盒规格：96T/48T

肽酶抑制因子3   英文名称：   Human Peptidase Inhibitor 3   规格：      英文缩写：   PI-3

过氧化物酶体增殖物活化受体γ   英文名称：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   规格：      英文缩写：   PPARγ

0酸化SMAD2/3抗体   英文名称：   Human Phosphor Mothers Against Decapeaplegic Homolog 2/3 aib动겸动

大鼠聚集蛋白聚糖(AGC)检测试剂盒 ，英文名： AGC ELISA Kit

Monkey Vascuoar endothelial cell growth factor receptor -3 (VEGFR-3) ELISA Kit血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)检测试剂盒

RatterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 大鼠末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFree-T3ELISAKit大鼠游离三甲状腺原

细胞活力蓝色荧光检测试剂盒50次

RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)检测试剂盒规格：96T/48T

双荧光素酶报告基因检测试剂盒APOA1重组小鼠 ApoA1 蛋白 Protein

蛋白二硫键异构酶(PDI)重组蛋白 Recombinant Protein Disulfide Isomerase (PDI)

RPRD1B重组人 RPRD1B 蛋白 Protein

IFNL1 Protein Human 重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

SELL Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白