核酸凝胶电泳观察法
时间：2011-11-02 阅读：500
荧光染料溴化乙锭可嵌入DNA堆积碱基间，DNA吸收的254nm的紫外辐射与溴化乙锭在302nm和366nm处的光吸收可在590nm处（可见光红橙区）发光，利于观察，用于核酸凝胶鉴定。
琼脂糖、溴化乙锭（10mg/ml）、6×loading buffer、凝胶电泳缓冲液（1×TAE或0.5×TBE）、电泳仪、电泳槽、微波炉
15%聚蔗糖（Ficoll 400型）（pharmacia）
1．配置凝胶电泳缓冲液，用相应的凝胶电泳缓冲液配置相应浓度的凝胶。
2．微波炉加热使凝胶融化，温度降至60℃左右加入溴化乙锭（终浓度为0.5μg/ml）混匀。
3．将胶倒入槽中至厚度约3-5mm左右，梳子距槽底1-2mm，并去除气泡。
5．DNA样品与6×loading buffer混匀加入凝胶加样孔中，接上电源，电压降采用1－5V/cm，DNA由负极向正极移动。
6．电泳一般30分钟足矣，可根据溴酚兰和二甲苯青FF的位置延长电泳时间，电泳完毕，UV下观察。
2．不同的DNA样品需不同的电泳方案，需参见文献。本文为一般常用法。