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基因枪的基本原理及影响因素

时间:2011-08-13      阅读:1420

人类早就梦想能够突破物种界限,按照人的意愿培育或改良动植物新品种。20世纪70年代,DNA重组技术的出现为人类愿望的实现提供了可能。在获得符合要求的基因之后,面临的是如何将基因导人所选择的细胞中,并使之稳定表达,出现所期望的遗传性状。其中,基因导人是关键的环节之一。随着动植物基因工程研究的相继开展,先后出现了化学介导、生物介导和物理介导等类型方法。在物理介导法中,有激光打孔、电击孔和基因枪等方法。

基因枪法,又称生物弹法或微粒枪法、微粒轰击法,是依赖高速度的金属颗粒将外源基因引入活体细胞的一种转化技术。它是继农杆菌介导转化法之后又一应用广泛的遗传转化技术。这种方法操作简单,效率高,适应性强。一次可以向数以千计的细胞导人基因,不受细胞、组织或器官的类型限制,此外其目标命中率高,因此格外受重视。基因枪根据其加速装置可分为火药式、电动式和气动式。

一、基本原理

经适当处理后,使DNA液均匀地吸附在或包裹于微小的钨粉或金粉颗粒表面,利用基因枪的火药爆炸、高压放电或高压气体作驱动力,发射出微弹与DNA的复合体,击中并高速穿透真空室中受体细胞的细胞壁及细胞膜,进入细胞内,从而达到将吸附于微弹上的外源DNA导人细胞或原生质体,获得整合与表达的目的。微弹复合体对受体细孢造成的损伤可以修复。

二、影响因素

1)不同浓度的CaClz对基因瞬时表达和稳定表达的影响。

2)添加亚精胺溶液与未加亚精胺的轰击对基因瞬间表达影响不大。

3)太高的氦气压力会对细胞造成不可逆的损伤。

4)轰击次数对愈伤组织转化的影响很小。

5)细胞处于不同的生理状态,初生愈伤组织细胞的结构紧密,细胞核大,质浓,而继代3个月后的愈伤组织逐渐老化,细胞液泡化程度高。

6)在基因枪转化前24h分别用5、10、20Gy丁射线辐照处理愈伤组织。5Gy处理的基因瞬时表达明显增强,抗性愈伤比例比对照提高近l倍。
 

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