人补体片断5a（C5a）ELISA Kit

 规格：原装/96T ELISA试剂盒分装 48T/96T ELISA试剂盒

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实验原理：以兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）Elisa试剂盒为例

本试剂盒应用间接法测定标本中兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）水平。用纯化的兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）标准品和未知浓度的Lp-PLA2待检样品，温育后，加入*标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）浓度。

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）去除颗粒。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

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