1.细胞爬片；  

2.PBS清洗标本 3次，各1 min。  

3.冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室温固定10~20min）；  

4.空气干燥5min，PBS漂洗3min，3次；  

5.细胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透细胞，室温15~30min（丙酮固定法不用此步骤）；  

6.PBS漂洗2次，每次5min；  

7. 3% H2O2去离子水室温孵育10min，PBS洗；  

8.正常山羊血清封闭，37℃孵育10~20min，甩掉封闭液，勿洗；  

9.加适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1~2h；  

10.PBS漂洗2次，每次5min；  

11.加入酶标二抗工作液，37℃，30-60min；  

12.PBS漂洗2次，每次5min；  

13.加DAB显色剂显色（或AEC显色），镜下观察结果，适时终止；  

14.苏木素轻度复染；  

15.脱水透明。

16. 封片，中性树胶封片。  光学显微镜观察，拍片。图象评分。