PKH26细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）

产品关键词：

PKH26；Calcein AM 钙黄绿素；PKH67；CFDA SE；In vivo cell tracking 体内细胞示踪；Sigma MINI26；Phanos Technologies；

产品信息

产品描述

PKH26细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记）（PKH26 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling）是一款基于荧光探针PKH26，用于常规细胞膜标记的检测试剂盒，适用于体外细胞标记，体外细胞增殖以及长期的体内细胞跟踪研究等。

PKH26是一种的膜标记探针，结构上带有一长脂肪族尾巴，能稳定插入细胞膜脂质区域。PKH26荧光处于黄-橙色光谱区间（见图1），大激发波长为551nm，大发射波长是567nm，与罗丹明或PE检测系统兼容。也可能用标准荧光素（Fluorescein）激发滤片，但荧光强度可能会有些降低。PKH26具长的体内半衰期，超过100天，非常适用于体内细胞示踪、细胞增殖研究和其他长期实验。

稀释液C（Diluent C）是本试剂盒配套提供的一种水溶性溶液，特别设计的一种标记媒介能维持细胞活力，同时大化染料溶解性和标记过程中的染色效率。Diluent C对哺乳动物细胞来说是等渗的，不含去污剂或有机溶剂，也不含生理盐和缓冲剂。根据细胞类型，染料标记后膜的内在化程度，标记细胞可能呈现不同的状态，从明亮，到均匀点状或斑驳状。然而，PKH26荧光在生理范围内不依赖于pH，且每个细胞的荧光强度通常不受染料位置的影响。

图1. PKH26的激发和发射光谱图

我司（懋康生物）提供三种规格的PKH26细胞连接试剂盒（用于常规细胞膜标记），其中：

Mini Kit（CAT#：MX4021-100UL）建议用于小量或初步研究。当使用2ml染色体积（含2μM 终浓度的PKH26），本试剂盒含有足量的染料用于检测25次细胞样本（2×10⁷个细胞/次），和足量的Diluent C用于5次细胞样本（2×10⁷个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定加的染料浓度。

Midi Kit（CAT#：MX4021-200UL）适用于中量研究。当使用2ml染色体积（含2μM 终浓度的PKH26），本试剂盒含有足量的染料用于检测50次细胞样本（2×10⁷个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×10⁷个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定加的染料浓度。

Maxi Kit（CAT#：MX4021-500UL）适用于大量或体内研究。当使用2ml染色体积（含2μM 终浓度的PKH26），本试剂盒含有足量的染料用于检测125次细胞样本（2×10⁷个细胞/次），和足量的Diluent C用于30次细胞样本（2×10⁷个细胞/次）。用户需根据细胞类型和实验目的来优化确定加的染料浓度

产品包装

注意事项

1）   PKH26是以溶于乙醇的储存液形式提供，保存的过程中需避光并拧紧盖子，以防止溶液挥发引起的染料浓度提高。使用前需检查是否有结晶，若有结晶，需在37℃水浴溶晶，超声或涡旋直至*溶解。

2）   Diluent C使用前需置于室温回温之后再配制标记用的细胞和染料工作液。Diluent C是无菌溶液，不含任何防腐剂或抗生素，使用和保存过程中都注意无菌。

3）   PKH26不能保存在Diluent C内，保存在Diluent C的染色工作液需在使用前配制，现配现用。

4）   荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。

5）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、  自行准备仪器和试剂（试剂盒不提供，用于常规细胞膜标记）

二、  常规细胞膜标记

【注意事项】：

1）   通过分配脂质染料进入细胞膜来进行标记。标记强度是染料浓度和细胞浓度共同作用的一种功能，且不会饱和。因此，用来标记的染料浓度需要有限，过度标记细胞会引起细胞膜完整性丧失和降低的细胞复原能力。

2）   以下步骤适用于体外或离体标记干细胞、淋巴细胞、单个核细胞、内皮细胞、神经元或任何需要将染料插入细胞膜脂质区的其他细胞类型。而体内标记、血小板标记，或在含非吞噬细胞的群体内选择性标记吞噬细胞，需对步骤做适当修改。

3）   需在单克隆抗体染色前进行常规细胞膜染色。4℃单克隆抗体染色过程中膜染料仍能维持稳定。然而，如果单抗标记后再室温下进行常规细胞膜染色，极有可能引起单抗的“盖帽”发生。

4）   以下步骤中用到的细胞和染料浓度是推荐用的起始浓度，广谱适用于各种细胞类型。用户需根据自身细胞类型和实验目的确定加的染料和细胞浓度，通过对染色后细胞活力（比如典化丙啶排斥），荧光强度，染色均匀性和对待研究细胞功能无影响等方面来综合评估。

5）   PKH26染色过程中需避免叠氮化物或代谢毒物的存在。

6）   虽然粘附在固相基质上的贴壁细胞可能被标记，使用单细胞悬浮液能得到更匀质的染色结果。染色前使用蛋白消化酶比如胰酶/EDTA处理贴壁或结合细胞制备成分散的单细胞悬液能得到hao的染色结果。

【染色流程】：

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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