货号： WT-E6079 产品名称： 小鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA试剂盒

ELISA基础知识及常见问题处理

ELISA（酶联免疫吸附试验）

lELISA（酶联免疫吸附试验）是一种酶免疫测定。在检验中主要通过抗原抗体于固相或液相载体中反应检测体液中的抗体或抗原性物质。通过辣根过氧化物酶（HRP)与底物液TBM的反应指示出所检测物质的有无。

l1　抗原：抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。

l2　抗体：抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。

l　　 机体被微生物感染后，先产生IgM抗体，然后产生IgG抗体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG抗体可*存在，在疾病*后可持续数年之久。

ELISA检测方法

l夹心法:

l双抗原（抗体）夹心法是检测抗原zui常用的方法，其检测方法：

l双抗原夹心：

l    固相(包被)抗原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标抗原Ag*  → Ag-Ab-Ag* + 底物(TMB)→显色

l双抗体夹心：

l    固相(包被)抗体Ab + 样品(抗原Ag) + 酶标抗体Ab *  → Ab-Ag-Ab* + 底物(TMB)→显色

间接法

l间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗*抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。

l其检测方法：

l     固相(包被)抗原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标二抗Ab*  → Ag-Ab-抗Ab* + 底物(TMB)→显色

l竞争法

l其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应：

l固相(包被)抗原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标抗体Ab*  → Ag-Ab + 底物(TMB)→不显色(+)

l固相(包被)抗原Ag + 样品(无抗体Ab) + 酶标抗体Ab*  → Ag-Ab* + 底物(TMB)→显色(-)

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