一、服务介绍
         透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是使用的一类电镜。通过发射电子束从而穿过超薄的样品，同时与样本相互作用，既而形成图像。透射电镜具有分辨率高和放大倍数高的优点。其分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万到几十万倍。目前透射电镜已经广泛的应用到癌症研究，病毒学研究，微生物学，细胞学研究等生物领域。

二、实验原理
透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备超薄切片(通常为50～100 nm)。要在机体死亡后的数分钟内取材，组织块要小(1mm3以内)，常用戊二醛和锇酸双重固定，包埋介质包埋,用超薄切片机切成薄片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。

三、实验流程

1.取材

2.固定

3.脱水

4.包埋

5.固化

6.超薄切片机切片(50-60 nm)

7.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色

8.透射电镜观察，拍片

四、客户提供

组织块、细胞等

五、公司提供

基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析

实验周期：2-3周

六、透射电镜取材注意事项

取材是电镜样品制备的*步，也是十分重要的一步。其操作成功与否直接关系到整个实验的成败。 为了得到好的结果，请务必认真做好zui关键的*步取材。因取材不规范导致实验失败本公司概不负责！取材基本要点：快（1min）、冷（4 ℃）、小（1mm 3 ）、净（无杂质）、准（部位准确）

动植物 组织取材流程及要求：

取材流程： 动物麻醉后，快速取出需要检测的组织，将组织切成 1 mm 3 左右小块，固定于 2.5%戊二醛固定液 4℃过夜后快递。植物组织除麻醉外，其他操作相同。
取材要求：
1.定位准确：解剖水平的准确定位误差应≤1mm。注意各组实验动物取材区位及方位的*性和代表性。
2.操作迅速：组织离开活体后，以zui快的速度浸入戊二醛固定液，0.5 min 或zui多2 min。事先准备好 l 1.5ml  尖头 P EP  管里面盛满预冷的戊二醛固定液。
3.标本尺寸大小：组织块大小需要在 1 mm 3 左右，样品太大会导致样品固定不充分。（提示：把较大标本块修整成符合要求的颗粒时，须事先准备一个蜡盘，滴入戊二醛固定液，把标本浸在液滴中修整，确认每个小标本颗粒都包含需要的结构内容，用牙签挑出 3～5 粒标本，放入 l 1.5ml  尖头 P EP  管。）

4．保持低温环境：为降低自溶酶活性，在 4℃低温条件下取材，容器和器械预冷；将修整好的标本块放入戊二醛固定液后，普通 4℃冰箱保存。细胞取材流程及要求

取材流程： 细胞直接刮下，细胞悬液离心，弃上清，PBS 清洗 2 次，离心成团，加入 2.5%戊二醛固定液 4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为细胞悬浮液操作。

固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到 PBS 中，后续操作*。
取材要求：
1．确认细胞数量充足（6cm 或 10cm 皿长满），离心后在 ep 管中 绿豆大小；
2．新鲜配置的电镜 2.5%戊二醛固定液，PH 值 7.3-7.4；
3．贴壁细胞用柔软细胞划子轻轻刮起成细胞悬液，尽量不要反复来回刮；
4．把细胞悬液置入洁净 l 1.5ml  尖头 P EP  管；
5．选择合适的离心速度和时间离心，一般 1000rpm 至 3000rpm，5min 至 10min(转
速及洗的时间请根据具体情况具体分析，比较脆弱敏感的细胞，尽量低转速、短时间，
以细胞离心成团为准！S PBS  洗的时间过长，容易造成自噬假阳性)；
6．取细胞团块，如致密团结即弃上清，注入新鲜 2.5%戊二醛固定液，4℃保存；
提示：
a．取离心好的细胞团块时，如细胞分散，可在离心管中注入约 5ul 血清后再次离心，至 EP 管底部出现致密细胞团块，即送电镜室。
b．细胞大小不同，*离心富集速率和时间不同。提前检索文献，避免反复离心损伤细胞。
需要客户提供的材料 ：
1、按照标准方法取材固定的实验样本（固定在戊二醛固定液中的样品）。
2、透射电镜实验登记表，电子版发送到 2880647011。
样本储存运输标准：
1、储存：样本取材后，4℃保存时间不超过 1 个月。
2、运输：泡沫盒+冰袋的方式运输， 样品用气泡膜包裹，避免标本瓶直接接触冰块，固定液充满 EP 管， 封口膜封口，以免邮寄途中液体渗出。
附表一：固定液配方（本公司有售）
A、 磷酸缓冲液的配方：
a 液：0.2M *贮备液：
Na2HPO4·2H2O
或：Na2HPO4·7H2O
或：Na2HPO4·12H2O
加双蒸水至
b 液：0.2M *贮备液：
17.81 克
26.83 克
35.82 克
500 毫升
NaH2PO4·H2O 13.8 克
或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克
加双蒸水至 500 毫升
使用时将 A 液 40.5ml 和 B 液 9.5ml 混合成 0.2 磷酸缓冲液。（PH7.4）
B、 2.5﹪戊二醛固定液的配方：
0.2M 磷酸缓冲液 50ml
25﹪戊二醛溶液 （电镜） 10ml
加双蒸水至 100ml
戊二醛溶液zui终浓度：pH 值 7.3-7.4