一、服务介绍

数字PCR即Digital PCR（dPCR)，是继一代普通PCR、二代荧光定量PCR之后的第三代PCR技术。相较于qPCR，数字PCR可直接数出DNA分子的个数，可以对起始样品定量，是一种全新的核酸分子定量技术。

dPCR与qPCR方法相比，本方法无需核酸标准品，定量的结果不再依赖于 Ct 值；又兼具qPCR方法的优点，且结果的精确度、准确性和灵敏度更佳。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域：拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究（如等位基因不平衡表达）、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等，在环境微生物和病原体基因的检测、遗传病、**、NGS数据验证等方面将具有更广阔的应用前景。

二、实验原理

通过把稀释到一定浓度的DNA分子分布在一定数目的微滴中，使大部分微滴中的DNA分子数目为1或0，然后通过PCR扩增和荧光信号的累计读取阳性微滴数目，有荧光信号的微滴判读为1；没有荧光信号的微滴判读为0，再根据泊松分布计算出样本中的DNA分子数。

三、服务流程

1、样品DNA（或RNA）提取及模板制备

2、引物探针设计合成

3、PCR扩增

4、检测微滴

5、分析数据、显示结果

四、客户提供

样本（DNA,RNA,血液，组织，石蜡切片等），样本的物种信息，基因信息（NCBI登录号）；探针选择Taqman还是MGB

血液样品：样品为EDTA抗凝或枸椽酸钠抗凝，样品量大于0.5 mL，样品采集后于-20°C或-80°C保存，低温（≤-4°C）运输。

组织样品：样品可以为新鲜组织（-80°C保存）或石蜡包埋的组织，也可以是95%乙醇中固定的组织，组织量大于100 mg。组织样品用干冰运输。

DNA样品：纯度OD260/280 比值为 1.6-1.8，浓度≥10 ng/μL，体积≥20 μL。

RNA样品：纯度OD260/280 比值为 1.8-2.0，浓度≥20 ng/μL，体积≥20 μL。需要干冰运输。

五、交付内容

实验报告：包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。

周期：1个月左右