犬ELISA试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中的含量。如需更多Elisa试剂盒产品,请来电详询。试剂盒严格按照说明书的操作进行,试剂不同批号组分不得混用。
在犬ELISA试剂盒科研实验中我们需要注意一些实验误差的问题,下面就是为实验减少误差的具体操作步骤:
1.实验使用前,将所有试剂充分摇匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免在实验加样时加入大量的气泡,实验时在加样上产生误差。
2.根据待检测样品的数量加上标准品的数量决定所需要使用的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品需根据自己的数量来定,如在实验中能使用复孔的则尽量做复孔。
3.将稀释好后的标准品50ul加入反应孔、并加入待测样品50ul在反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡使其均匀,在37℃的条件下温育1小时。
4.以上实验结束后即甩去孔内的液体,每孔均加满洗涤液,振荡30秒后,甩去孔内的洗涤液,用吸水纸拍干。重复操作3次即可。如果用洗板机洗涤,洗涤次数则需增加一次。
5.在每孔中加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡使其摇匀,在37℃的条件下温育30分钟。
6.将孔内的液体甩去,将每个孔中加满洗涤液,振荡30秒后,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 将每个孔中均加入底物A、B各50ul,轻轻振荡摇匀,在37℃的条件下温育10分钟。注意:避免光照。
8.在取出酶标板时,即迅速加入50ul终止液,加入终止液后立即测定结果。
9.zui后即在450nm波长处测定各孔的OD值。
使用说明书样品收集、处理及保存方法:
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。