人低转移肝癌细胞:MHCC97-L 细胞株类
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人低转移肝癌细胞:MHCC97-L 细胞株类

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2023-08-03 09:09:04
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产品简介

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详细介绍

商品介绍:
名称   MHCC97-L (人低转移肝癌细胞)
别称 MHCC 97-L; MHCC97L

年龄(性别) 39

组织来源 肝;肝癌

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 上皮细胞样

生长培养基 RPMI-164010% FBS1% P/S

推荐传代比例 1:2-1:4

推荐换液频率 2~3/

冻存条件

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度:液氮

培养条件

气相:空气,95%CO25%

温度:37

产品名称

规格

分类

货号

人低转移肝癌细胞:MHCC97-L

1×10cells/T25培养瓶

细胞系

BJ-X96813

实验要点及说明:
1
.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2
.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3
.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4
.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5
.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告:          

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 0.1%   I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入34mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10 FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ 5CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

 

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

2PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1Triton   X-100透膜15min

3PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h

6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

 

细胞培养的优点:

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.
研究条件可以人为控制
pH
、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.
研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.
研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.
研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.
研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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