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中文名称：定点突变试剂盒
英文名称：HiperMut Site-Directed Mutagenesis Kit
产品规格：10T
发货周期：1～3天
产品货号：BJ-F0164554
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。产品介绍：
本试剂盒是基于HiperClone快速克隆技术的定点突变系统。使用本试剂盒，目标质粒扩增产物经DpnI消化、HiperClone重组环化后直接进行转化即可完成定点突变。 本试剂盒由两个模块组成：Hiper II Pfu DNA聚合酶扩增模块和HiperClone快速克隆模块。Hiper II Pfu DNA聚合酶高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性，其的长片段扩增能力，广泛适用于长度小于20kb的任何质粒扩增。HiperClone快速克隆系统用高效的同源重组反应替代传统的退火成环反应。因此使用HiperMut定点突变试剂盒进行DNA定点突变时，引物设计更加灵活，且扩增反应不再需要以线性方式进行，极大减少了模板使用量，有于原始甲基化模板的*降解。HiperClone技术可以高效完成两个PCR产物的无缝拼接，因此该试剂盒还能以单次扩增的方式对目标质粒上不连续的两个位点同时进行突变。 本试剂盒中的重组酶Exnase经过优化，专门针对单碱基、不连续双碱基定点突变。此外，如扩增产物特异，其DpnI消化产物可不进行DNA纯化而直接用于重组反应。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及*的成功率，使得本试剂盒成为DNA定点突变选产品。 保存：-20℃，有效期1年。 |
使用方法：本产品仅用于科研
注意：标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)。
鼻拭子的采集：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上，连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱)，放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封，由专人(2人)运送，不得邮寄，最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的，需在4℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存最好在-70℃温度以下进行。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
PH4-5显色（BROMOCRESOL GREEN）指示溶液
PH5-6显色（CHLOROPHENOL RED）指示溶液
PH6-7显色（BROMOTHYMOL BLUE）指示溶液
PH7-8显色（PHENOL RED）指示溶液
PH8-9显色（THYMOL BLUE）指示溶液
小鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)elisa ，英文名： EG-VEGF ELISA Kit
大鼠腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA检测试剂盒Ratnicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 96T/48T
人氧化酶(DAO)免疫试剂盒 Human diamine oxidase,DAO ELISA Kit
Ratmalondialchehyche,MDAELISAKit大鼠二(MDA)elisa规格：96T/48T
DHPR受体蛋白表达检测试剂盒20次
Mousepara-aminobenzoicacid,PABAelisa小鼠对(PABA)elisa规格：96T/48T
定点突变试剂盒豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)elisa检测试剂盒
豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)elisa分析检测试剂盒
豚鼠谷丙转氨酶(ALT)elisa检测试剂盒
豚鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira)elisa检测试剂盒
豚鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira)elisa分析检测试剂盒
