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操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
中文名称：蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅰ
英文名称：Phosphotase Inhibitor Cocktail 1
产品规格：1mL
发货周期：1～3天
产品货号：BJ-F0164767
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。
产品介绍：
组织/细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，导致不同于正常生理状态的差异，影响实验结果。因此，加入外源性蛋白磷酸酶抑制剂，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态，是Western Blotting、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质和蛋白活性测定等研究*的一步。本产品就是针对这一用途开发。 产品特点： 1．即开即用，不需要单独购买每个成分然后再配制。 2．由5种蛋白磷酸酶抑制剂(钒酸钠、氟化钠、钼酸钠、酒石酸钠、咪唑)组成，各成分的浓度经过精心优化。 3．抑制谱广，能特异性地抑制丝磷酸酶、苏磷酸酶、酪磷酸酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和ATP酶。 4．与各种细胞裂解液兼容。 5．使用简单，在细胞裂解液中按一定比例加入即可(根据蛋白磷酸酶决定，一般按1/100的体积比)。 6．适用于Western blot、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白活性测定等试验。 储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。 使用方法： 1.在临用前溶解本产品，并按1/100的比例加入到细胞裂解液中(1mL细胞裂解液中加入10μl)。注意：对蛋白磷酸酶含量特别丰富的组织，可以将加入比列提高到1/20-1/50。 2.后续处理按常规方法进行即可。 注意：避免反复冻融本产品，所以次溶化后，如果还有剩余，可将其分装成小份冻存，每次用多少取多少。 |
使用方法：本产品仅用于科研
注意：标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)。
鼻拭子的采集：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上，连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱)，放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封，由专人(2人)运送，不得邮寄，最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的，需在4℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存最好在-70℃温度以下进行。
分子生物级溴化乙锭（Ethidium Bromide）染色液
（1毫克/毫升）或（10毫克/毫升）
SYBR绿色荧光核酸染色试剂盒（配制25毫升/次）
SYBR绿色荧光核酸染色（20X）
溴酚蓝（BROMPHENOL BLUE）溶液（100毫克/毫升）
小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)elisa ，英文名： TARC/CCL17 ELISA Kit
牛β羟(βOHB)ELISA检测试剂盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T
人8异前列(8-iso-PG)免疫试剂盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit
英文名称MouseIerleukin-1α,IL-1αELISAkit小鼠白介素1α(IL-1α)规格：96T/48T
冰冻切片组织CASPASE-10蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次
Ratclusterofdiffereiation8,CD8elisa大鼠CD8分子(CD8)elisa规格：96T/48T
蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅰ小鼠Ⅲ(FⅢ)elisa分析检测试剂盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa检测试剂盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa分析检测试剂盒
小鼠Ⅱ(F2)elisa检测试剂盒
小鼠Ⅰ(FⅠ)elisa检测试剂盒
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
