BL21 (DE3)化学感受态细胞
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BL21 (DE3)化学感受态细胞

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-06-13 11:00:22
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编号 :BJ-F0164557;
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BJ-F0164557
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上海邦景实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

中文名称:BL21 (DE3)化学感受态细胞
英文名称:BL21 (DE3) Chemically Competent Cell
产品规格:100μl×10
发货周期:13
产品货号:BJ-F0164557

产品介绍:

本品是在大肠杆菌BL21DE3)菌株基础上制备的化学转化感受态细胞,是以T7 RNA聚合酶为表达系统的基因的高效表达宿主,其基因型为F-ompT hsdS   (rB- mB-) gal dcm (DE3)。经检测,本品无外源质粒DNA残留,转化效率≥107 cfu/μg pUC19 DNA。适合非毒性蛋白重组表达。

组份:

BL21 (DE3)化学感受态细胞 100μl×10

pUC190.1 ng/μl 5μl

注意事项

1)感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用。

2)待转化DNA加入体积不要过感受态细胞体积的1/10

3)待转化DNA加入感受态细胞后,请勿用移液枪吹打,轻轻弹匀即可。

4)为确保高效率转化,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5)本品应于-80℃保存,请勿将感受态细胞储存于-20℃或液氮中保存。

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件:-80

使用方法:本产品仅用于科研
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由专人(2)运送,不得邮寄,最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在-70以下保存。无-70条件的,需在4冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20-40时不稳定,故长期保存最好在-70温度以下进行。

注意事项:
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

操作规程
1
、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升500010000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2
.加入适当浓度的010μL 受试化合物。
3
、将96孔板在37,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4
、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5
、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6
、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7
、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8
、结果分析
 a
、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD×100
 b
、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

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