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公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
产品名称 | 规格 | 货号 |
ssDNA/RNA环化连接酶 | 2000U | BJ-PJ6645 |
ssDNA/RNA环化连接酶 | 20KU | BJ-PJ6645 |
描述: ssDNA/RNA CircLigase 为热稳定的 DNA/RNA 连接 酶,不依赖于 ATP,可催化单链 DNA 或单链 RNA 的分子内 环化。环化反应中,要求催化底物单链 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基团和 3’-OH 基团。对于大于 15nt 的单链底物,该酶 都能高效的连接。
组分
活性定义:65°C 1h 条件下,催化 1pmol 5’-磷酸化的 ssDNA
底物环化,所需的酶量定义为 1Unit。
储存:-20℃可保存 3 年。
反应实例
1. 按以下组分配制反应液
CircLigase (100 U/μl) 1 μl
5’磷酸化 ssDNA/RNA 10-100 pmol
10×CircLigase Buffer 2 μl
50mM MnCl2 1 μl
ddH2O Up to 20 ul
65°C 孵育 1h 进行环化反应。
2. 失活反应
反应结束后,可加入终浓度 10mM EDTA 终止反应。或采用
加热方式 85℃ 10min 加热失活。
使用注意事项:
(1) 环化底物 ssDNA 或 RNA 必须带有 5’磷酸基团,3’端含有 OH。
(2) 环化体系中的 ATP 浓度高于 20μM 以上时会极大抑制环化效率,甚至导致环化失败。因此建议底物为纯化产物。
(3) 由于本酶提高了耐热性,在 65℃条件下进行连接反应,在测试中 Betain 无益于连接效率提升。
(4) 本酶主要进行分子内环化连接,分子间的连接未检测到。
(5) 本酶对 ssDNA 和 RNA 的环化效率高,多数情况下,90%以上的底物被环化。未被环化的 ssDNA 可通过加入 5U的 Exonuclease I,37°C 消化 15min 去除,以获得高纯度的环化 ssDNA。未环化的 ssRNA,将稍后给出去除方案。
(6) 本酶可以连接 15nt 以上的核苷酸,更长的产物连接参数,将稍后给出测试报告及 protocol。
(7) 对于连接底物量较少的实验来讲,推荐缩小体系,而不是减少酶的用量。在小体系实验时注意体系的蒸发,可加入矿物油以防止蒸发。
公司正在出售的产品:
ALKB蛋白封闭多肽 | 草鱼肝脏细胞;L8824 |
1号染色体开放阅读框129封闭多肽 | 小鼠骨髓瘤细胞;Sp2/0-Ag14 |
自噬相关蛋白3封闭多肽 | 犬肾细胞;MDCK/IgR |
1号染色体开放阅读框163封闭多肽 | 杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7E7 |
重组小鼠GFRAL蛋白 | 折光马尔太虫PCR试剂盒 |
TSK蛋白封闭多肽 | 猪布氏杆菌PCR检测试剂盒 |
烟碱型乙酰受体α7封闭多肽 | 蛛网菌PCR试剂盒 |
3-氨基-2-恶唑烷酮牛血清白蛋白偶联物 | 病毒PCR试剂盒 |
GTPmeiIMAP家族成员4封闭多肽 | 猪肠病毒PCR检测试剂盒 |
人角质形成细胞 | 诺氏梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒 |
兔角膜基质细胞 | 血浆酯转移蛋白ELISA试剂盒 |
人典型小细胞肺癌细胞;NCI-H1688 | B淋巴细胞抗原ELISA试剂盒 |
人骨肉瘤细胞;MNNG/HOSCl#5[R-1059-D] | 乙醇脱氢mei2ELISA试剂盒 |
人低分化鼻咽癌细胞株;CNE2-S18 | B细胞受体相关蛋白31ELISA试剂盒 |
大鼠气管上皮细胞 | CopineⅡ蛋白ELISA试剂盒 |