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描述：BCA 蛋白质定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根 据目前世界上常用的蛋白浓度检测方法之一－BCA （bicinchoninic acid）法改良研制而成，该试剂盒具有蛋白 浓度测定的简单性，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。本试 剂盒的原理是蛋白质分子中的肽键结构在碱性环境下能与 Cu2+络合生成络合物，将 Cu2+还原成 Cu+，而 BCA 试剂可 敏感特异地与 Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在 562nm 处有大光吸收值，该复合物颜色深浅与蛋白质浓度 成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白的含量，1 小时内 即可完成蛋白定量检测。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA） 溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为 25～2000 μg/ml。该 试剂盒可用于 20 次试管检测或 200 次 ELISA 板检测。

操作方法
1. 标准品的稀释：按下表将 BSA 进行稀释。
管号 PBS
BSA 体积
（来源）
BSA 终浓度
（μg/ml）
A 0 300 μl (母液) 2000
B 125 μl 375 μl (母液) 1500
C 325 μl 325 μl (母液) 1000
D 175 μl 175 μl (B 管) 750
E 325 μl 325 μl (C 管) 500
F 325 μl 325 μl (E 管) 250
G 325 μl 325 μl (F 管) 125
H 400 μl 100 μl (G 管) 25
I 400 μl 0 0
2. BCA 工作液的配置：根据样品数量及测定方法，将 BCA Reagent A 和 BCA Reagent B 按体积比 50:1充分混匀即可。
注意：配制 BCA 工作液前请将 BCA Reagent A 混匀。
3. 标准比色杯测定方法
(1)吸取 0.1 ml 的各标准品和待测样品置于合适的管中。
(2)加入 2 ml BCA 工作液，充分混匀。
(3)37℃孵育 30 min，然后室温静置 10 min。
(4)紫外分光光度计于 562 nm 处检测吸光度。
(5)绘制标准曲线。
(6)根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
4. 微管测定方法
(1)分别取 25 μl 新鲜配制的 BSA 标准液和待测样品，加入到 ELISA 反应板中。
(2)每孔加入 200 μl BCA 工作液，充分混匀。
(3)37℃孵育 30 min，然后室温静置 10 min。
(4)酶标仪于 562nm 处检测吸光度。
(5)绘制标准曲线。
(6)根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项
1. 待测样品浓度在 25~2000 μg/ml 的范围内具有良好的线性关系。
2. BCA 工作液配制后 24 小时内使用效果稳定。
3. BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。
4. 使用普通的分光光度计测定时，需根据比色皿的小检测体积，适当加大 BCA 工作液的用量，使其不小于小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例调整。
5. 适用范围

实例操作 按上述操作方法可得到如下标准工作曲线，该线性方程经过 多次绘制，系数均为 0.0001，且 R 2 值均在 0.99~1 之间， 重复性好，在计算蛋白浓度时可直接用该标准工作曲线进行 计算。例如：在 562 nm 处检测吸光值为 0.1，则此时 y 值 为 0.1，代入方程 y=0.0001x 中，可得蛋白浓度为 1000 μg/ml。

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