肿瘤坏死因子检测试剂盒中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：
 

　　1、固相载体的选择：人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
 

　　2、包被抗体(或抗原)的选择：人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值*而蛋白量少的浓度。人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
 

　　肿瘤坏死因子检测试剂盒操作步骤：各试剂在使用前平衡至室温。
 

　　1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，注意不要有气泡，轻轻混匀，酶标板加上盖，37℃反应120分钟。
 

　　2、弃去液体，甩干，不用洗涤。

　　3、每孔加检测溶液A工作液 100ul，37℃,60分钟。洗板3次，350ul/每孔，甩干。
 

　　4、每孔加检测溶液B工作液 100ul，37℃，60分钟，洗板5次，甩干。
 

　　5、依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟(此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显)。
 

　　6、依序每孔加终止溶液50ul，终止反应。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。