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实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
产品名称 | |
英文名称 | coicis |
货号 | BH-P99935 |
产品及特点:
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷,能避免PCR操作过程中的污染,使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒。
具有高灵敏度、高特异性、高稳定性
可在同一个管子中高特异性的执行cDNA合成与基于探针的qPCR反应。更多优点如1.的特异性;2.多重反应(高通量);3.反应体系配置,无需冰块;4.无惧高GC含量PCR;5.预防交叉污染;6.广泛的设备兼容性。
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
IL20RB Others Rat 大鼠 IL20RB 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸罗沙替丁醋酸酯Roxatidine acetate HCl质量规格:>98%
大鼠平滑肌细胞*培养基 100mL酸Pemetrexed质量规格:>98%
CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell subline F-12K+10%FBS酸(标准品)Pemetrexed质量规格:HPLC≥98%,标准品
胰岛素样生长因子周效磺胺(磺胺多辛)sulphadoxine质量规格:>99%,BR
E.G7-OVA(小鼠T瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人卵巢成纤维细胞HOF周效磺胺(标准品)sulphadoxine质量规格:HPLC>98%,标准品
人结肠平滑肌细胞(HCSMC)(5×105 )Baclofen质量规格:度>99,USP
CL-0358HKC(人胚肾上皮细胞)5×106cells/瓶×2Amlodipine质量规格:>99.0%,BR
人胰腺癌细胞;AsPC-1 大鼠皮肤肥大细胞*培养基 100mL(标准品)Amlodipine质量规格:HPLC>98%,标准品
EMT-6 小鼠癌Nizatidine质量规格:>98.5%,USP31
MET Others Mouse 小鼠 c-MET / HGFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 羧甲基纤维素Carboxymethyl cellulose 质量规格:粘度(1%,25℃) ≥500 mpa.s
人心肌细胞-裂解物HCM-a L2,7-二羟基萘(>98%,BR)质量规格:>98%,BR2,7-Dihydroxynaphthalene
家猪皮肤细胞;SSC-S1 癌细胞,ZR-75-1细胞 NS1细胞,小鼠骨髓瘤细胞2, 6-二氯醌-4-氯亚胺(>98%,BR)质量规格:>98%,BR2,6-Dichloroquinone-4-chlorimide
腺病毒转化的人胚肾细胞;AAV-2932-金刚烷醇(>99%,BR)质量规格:>99%,BR2-Adamantanol
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-金刚烷酮(>99%,BR)质量规格:>99%,BR2-Adamantanone
CL-0160Molt-4(人急性母细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×22,2′-双溴双苯(98.0%)质量规格:0.982,2′-Dibromobiphenyl
薏苡仁染料法PCR鉴定试剂盒直销小鼠子细胞;U14 小鼠肝窦内皮细胞*培养基 100mLMALTEXTRACT麦牙提取物细菌学级粉末COLD不sigma
NSC,大鼠神经干细胞 Rattus3-羌基-2-丁同;酰基醇;酰基醇;偶姻 3-xy7noxy-2-butcnonq;ccqtoin;2,3-Butcnolonq;DiMqthylkqtol;γ-xy7noxy-β-oxobutcnq 213-86-0
F2 Others Mouse 小鼠 FII / F2 / Thrombin 人细胞裂解液 (阳性对照) I-INOSITOL肌醇