温度验证就是指在某些产品的生产制造过程、存储、运输过程中，为了保证温度在一个规定的范围内并且符合一定的规范要求而进行的一项验证工作。

 ISO/cGMP/EN/GB等参照标准：我们通过风险评估、参照cGMP、ISO等标准及GB国内标准 FDA/EU/WHO认证认可：检测方案、检测报告得到FDA/EU/WHO国外检察官认可

灭菌器温度验证除了对设备的基本要求外，药厂一般需要针对灭菌器做以下的一些测试来确保灭菌器的使用是否符合要求。

一、温度分布：温度分布一般分为空载温度分布和负载温度分布，负载温度分布又根据实际灭菌情况一般会进行min负载以及满载两种情况（视实际灭菌情况而定，不同药厂需求不一样，测试条件也就不一样）

二、热穿透检测：一般情况下分为湿热灭菌和干热灭菌两种，由此会涉及到一些基本概念，灭菌效果衡量F值

F值：在z值条件下，一个温度为T，时间为t的灭菌程序，等效于Tref时所需要的时间。

F0值：（湿热灭菌效果衡量）

    在Z=10℃条件下，一个温度为T，时间为t的灭菌程序，等效于Tref=121.1℃时所需要的时间。

FH值：（干热灭菌效果衡量）

   在Z=20℃条件下，一个温度为T，时间为t的灭菌程序，等效于Tref=170℃时所需要的时间

干热出热原效果衡量FH值Tref=170℃ Z=54℃

注释：①灭菌温度系数Z值：某微生物的D值下降为之前的1/10所需要升高的温度

②微生物耐热参数DT值：在温度为T的条件下，使得微生物减少90%所需要的时间

不同药厂根据所需要灭菌的物品的不同，所要求的F0值或Fh值也不同，这个要根据具体情况而定。

举例：某台高压蒸汽灭菌器，所需验证程序有115℃ 30min ；121℃ 20min 和115℃ 30min 是该药厂用来灭培养基的温度设定程序，121℃ 20min一般所灭菌的物品为玻璃器皿、洁净服、和废弃菌种这些可以过渡灭杀的物品。这两个程序都需要验证空载温度分布、min负载热穿透以及max负载热穿透，其中空载温度分布是验证该灭菌器在空载运行状态下在灭菌阶段时其腔体内部是否能够满足温度分布的要求，负载热穿透（max负载以及min负载）时，其灭菌效果是否能够达到药厂所要求的灭菌效果（具体的就是以F0值来体现）

灭菌柜温度验证的方法如下：

一、空载热分布测试

1.至少选择10个温度探头，（较大的灭菌器可以选择15~20个探头），编号后固定在水平向和垂直向有代表性的空间内，几何中心和角落应有代表性点，另外在与温度控制传感器相连的冷凝水排放口（低温点）放置探头。

2.连续重复3次测试应符合要求。

注意:

(1)测温探头不能与灭菌腔的金属表面接触，连接线应与设备密封完好。通常情况下，冷凝的排水口是可能的冷点。

(2)验证过程中无论使用有线传感器还是无线温度探头，探头必须校正。通常在验证前和验证后全部探头在恒温炉中进行测试。通常可以进行0℃、125℃两个条件的测试，各探头校准偏差应小于±0.5℃(验证设备有特殊要求时，可依据相关要求进行校准）。

(3)探头数量依据灭菌器托盘而定，但为保证热分布测试的代表性，探头必须覆盖被分化成大致体积一致的整个空间，生产操作中三点必须要求：冷点的产品探头、设备本身附带的温度探头、冷凝排水口探头。

二、满载热分布和热穿透试验

1.过度杀灭法：测试时，通常只考虑连续进行3次热穿透试验，以确保测试点持续到达足够的杀灭效力。热穿透温度探头可以根据热分布数据放置在难穿透点的灭菌物中。

A 同一物品灭菌时探头应均一分布；多种物品混装灭菌时控头放置点应有代表性，获得的温度数据可以确定难于灭菌的位置。对于热穿透探头数量没有硬性规定，但minF0值必须大于12分钟。

B 每个循环从开始到灭菌的时间应该一致的，可重现的。就重要性而言，通常只关注热穿透数据，而对于热分布温度没有硬性标准。热分布数据多用于考察随着使用时间延长设备本身的性能变化。实施热穿透测试时，如果同时进行热分布测试，则热穿透探头数量和温度分布探头的*比例为5:1。设备负荷应该考虑一定灵活性，以便生产作业时部分装载。

对均一灭菌物（如胶塞）而言，负载中的冷点非常容易识别。因此部分装载往往视为已验

证的整体装载的一部分。注意：负载的冷点因待灭菌物的包装方式、结构、灭菌物类型而

不同。实施热穿透试验前，首先应明确装载布置图。

2.残存概率法：对于该灭菌方式，满载热分布和热穿透测试应分别实施，并制定详细的温度探头分布图。满载热分布温度探头分布与空载一致。每种装载的连续3次测试应能够证实温度分布的重现性。热分布的温度要求为同一时刻各点之间的差值应不超过2℃。热穿透测试探头通常随着灭菌器容积大小而变化。典型的装载托盘或装载车至少配置10只探头，全部插入相应的产品容器，将容器固定在难于穿透的位置进行测试。通过验证试验确认热点、冷点、选择的温度控制点之间的关系。热穿透数据可以证实负载内所获取的max温度和maxF0值，应不影响产品的质量稳定性，同时确保冷点达到足够的杀灭效果。

三、微生物挑战性试验

1.在过度杀灭法中，通常选择菌种G.stearothermophilus或其芽孢，也可采用其他对湿热灭菌耐热性强的微生物。

2.在残存概率法中典型的生物指示剂包括：Clostridium sporogenes (生梭芽抱杆菌）、Bacillus smithii(史密氏杆菌）和Bacillus subtilis (枯草芽孢杆菌5230)。

生物指示剂可以放置在温度探头的测试点附近，灭菌后的生物指示剂通过复活、相关的微生物测试程序，应证实灭菌程序可以实现低于10^-6的存活概率。

四、气密性试验

将绝压变送器安装在灭菌腔室上，抽真空，至内室压力为7kpa（或以下），关闭全部与灭菌室相连的阀门、真空泵，观察时间t和压力p1 至少等待300秒，但不得超过600秒，让灭菌器的冷凝水汽化，然后记录时间t2和p2 。600秒±100秒之后，再记录一次t3和p3 计算600秒内的升压速率=（P3-P2)/(T3-T2)

判定标准：不应超出1.3kpa/10min。

灭菌器温度验证依据标准：

2010版GMP及指南

ISO 17665 : 《Sterilisation of health care products - moist heat.》

《卫生保健品灭菌-蒸汽灭菌》

EN 285：2015 : 《 sterilises  Steam sterilisers – Big sterilisers》

《灭菌 蒸汽灭菌 大型灭菌设备》

GB 8599-2008《 大型蒸汽灭菌器技术要求自动控制型》

药品GMP指南2010

YY 0646-2015 《小型蒸汽灭菌器 自动控制型》

JBT 20001-2011《注射剂灭菌器》

现行版中国药典