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卡式罐顶部密闭,顶盖上装有:3个紧箍、绝缘提环、可进行通氧/排气的气孔,隔膜连接件用于检查纯种酵母培养。标准卡式罐提供完整的连接管和可进行无菌通氧的单独过滤器。卡式罐设计为可将其较容易地直接放入杀菌釜内 [1] 。
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便于通氧;给酵母转移提供了安全的条件;较易清洗;运输方便。
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酵母扩培的主要任务是在规定的时间内,培养足够数量的强壮纯种酵母,即在保证扩培过程中培养酵母健壮生长的同时,不允许其它微生物生长。在实验室扩培阶段,70%的染菌是卡氏罐阶段,因为该阶段不能象大生产一样自动控制,相对其它实验室扩培来讲体积较大,控制较难。因此,如何减少卡氏罐阶段的染菌机会就成了每个扩培人员必须思考的问题。。
1.三角瓶培养结束后将菌液从卡氏罐接种口倒人卡氏罐。为减少染菌机会,特别制作火圈,在接种时通过燃烧的火圈从接种口将菌液倒入。此方法存在三个弊端:①接种过程中,火圈易将与火接触的酵母种烧死,使酵母死亡率增加;②接种过程中,接种口是打开的,因卡氏罐较高,不能用超菌台的无菌风保护,加之火圈火力不可能很大,室内的细菌很容易从接种口进人卡氏罐,从而增加染菌机率。③接种过程中,菌液易粘于接种口边缘,而增加染菌机会。
2.卡氏罐前一阶段扩培采用抽滤瓶(耐压性必须好),培养过程中抽滤瓶口和侧管用纱布包扎,卡氏罐接种时将抽滤瓶口部换成橡胶塞(胶塞中间带有一支通至抽滤瓶底部的玻璃管,用生料带与橡胶塞密封,事先包扎灭菌),从抽滤瓶侧管通入压缩空气或氧气将菌液通过玻璃管从卡氏罐取样口处将酵母压入卡氏罐。
3.方式2较方式l由于在接种过程中菌液不曝露于空气中,故减少了染菌机会,且可以减少接种过程引起的酵母死亡,但此方法仍有局限性:①此装置对管路的密封性要求较高,如果稍有渗漏,即可能引起接种失败。②实验室内要有无菌气源,如果气源微生物不合格,反而会增加染菌机会。③卡氏罐接种前将所菌液管路灭好菌,在卡氏罐接种前将其换在抽滤瓶上,换的过程仍有一定的染菌机会。④需要两人配合操作。
将巴氏瓶侧管处连接一条硅胶管,另一头连接卡氏罐卡扣,卡氏罐空罐灭菌时即将硅胶管和卡扣连接好。卡氏罐接种时,只需将巴氏瓶侧管的卡扣与卡氏罐取样口相连接,将巴氏瓶举至高于卡氏罐取样口,略倾巴氏瓶至侧管被种液浸没,用手捏橡胶管,种液即接人卡氏罐 [2] 。
改进的卡氏罐接种方式的优点:①因接种过程无需气源,故不会因气源微生物不合格而引起染菌。②操作过程简单,只需1人即可完成接种操作。③整个接种过程没有菌液直接与外界空气的接触机会,从而大大减少了接种过程的染菌机会。④接种过程不会引起酵母死亡率的增加。⑤无方式2的管路不严的接种失败危险。实际操作证明,改进后的接种方式简单、方便,能满足酵母扩培的需要。