DuraScribe®T7转录试剂盒可生成抗RNase A降解的DuraScript®RNA。 这是通过在DuraScribe体外转录反应中用2'-氟-dCTP（2'-F-dCTP）和2'-氟-dUTP（2'-F-dUTP）*替换经典CTP和UTP来实现的。 该试剂盒采用DuraScribe T7 RNA聚合酶，一种突变型T7 RNA聚合酶，可有效地将2'-F-dCTP和2'-F-dUTP，ATP和GTP整合到RNA中。 DuraScribe T7 RNA聚合酶使用与标准T7 RNA聚合酶相同的转录启动子序列。

    DuraScribe®T7转录试剂盒产生DuraScript®RNA，耐RNase A降解。这是通过将DuraScribe体外转录反应中的标准CTP和UTP*替换为2 ' -Fluorine-dCTP (2 ' -F-dCTP)和2 ' -Fluorine-dUTP (2 ' -F-dUTP)来完成的。该试剂盒具有DuraScribe T7 RNA聚合酶，一种突变的T7 RNA聚合酶，可以有效地将2 ' -F-dCTP和2 ' -F-dUTP、ATP和GTP整合到RNA中。DuraScribe T7 RNA聚合酶利用与标准T7 RNA聚合酶相同的转录启动子序列。

优点：

稳定：由该试剂盒生产的DuraScript®RNA*耐受RNase A降解；

高产量：根据转录本的大小，至少产生110~307 pmol的DuraScript®RNA；

模板灵活：使用标准T7启动子，接受各种模板DNA，包括线性化载体，PCR产物，cDNA和dsDNA寡核苷酸；

多用途兼容：合成具有RNase A抗性的长或短转录本，以便用于SELEX筛选核酸适配体或RNA干扰。

组成成分：

▪ DuraScribe T7 Enzyme Mix (200   U/µL): -20°C

▪ DuraScribe T7  10X Reaction Buffer：-20°C

▪ ATP (50 mM): -20°C

▪ GTP (50 mM)：-20°C

▪ GTP (50 mM): -20°C

▪ 2′-F-dCTP (50 mM): -20°C

▪ 2′-F-dUTP (50 mM): -20°C

▪ DTT (100 mM): -20°C

▪ RNase-Free DNase I  (1 U/µL)：-20°C

▪ Control Template DNA (0.5 µg/µL): -20°C

Lucigen提供的AmpliScribe™T7-Flash™ Transcription Kit使用特殊技术，用户在30分钟内即可完成体外转录反应，获得高质量RNA。每个标准的AmpliScribe™ T7-Flash™transcription反应在30分钟内可从1μg线性化DNA模板中产生160-180μg RNA。该试剂盒可用于生成各种大小的RNA转录本（从<50bp到>9kb）。另外，Lucigen还提供bition标记的转录试剂盒——AmpliScribe™T7-Flash™ Biotin-RNA Transcription Kit，能将bition-16-UTP整合到RNA转录产物中。

参考文献：

1. Molecular   Cloning - A Laboratory Manual, Third Edition, 2001. CSHL Press. pp 7.27 – 7.34.  J. Sambrook and D.   Russell.

2. MEGAscript™ T7 试剂盒是一种超高得率体外转录试剂盒。通过改变典型的转录反应条件，可以有效利用的核苷酸浓度，从而获得较高的得率。T7 酶混合物和 10X 反应缓冲液针对每个批次和 RNA 聚合酶进行了专门校准。
   
   使用 MEGAscript™ T7 试剂盒
   MEGAscript™ T7 试剂盒包含体外转录反应成分及对照模板。该试剂盒将从随试剂盒提供的对照模板中产生总计 3–5 mg RNA（约 100 µg RNA 或更多/反应）。这相当于每摩尔模板产生 400–650 摩尔 RNA。较小的模板通常产生较低质量和较高摩尔得率的产物。新型转录反应条件和的高得率技术使得 RNA 合成量可达常规转录反应生成的 RNA 量的 10–50 倍。
   
   应用
   MEGAscript™ T7 试剂盒用于合成大量未标记或低比活度 RNA，以用于多种用途、包括体外翻译、反义/显微注射研究以及 RNA 结合蛋白的分离。在大规模转录反应中，所有 4 个核苷酸的浓度都很高，远高于酶的 Km。MEGAscript™ T7 试剂盒的 RNA 得率通常比传统体外转录反应高出 10 倍以上。不建议将该试剂盒用于合成高比活度探针。
   

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